论文摘要
目的:观察MCI、AD及CN各组在SPECT rCBF、P300与MMSE评分等临床综合性评定的不同表现及特点,同时检测以上各组脑脊液中GAP-43、Aβ1-42生化指标含量的变化,为进一步阐明MCI的临床特点及其防治提供理论依据,进而提高AD早期诊断的特异性和敏感性。方法:入选2006-01～2007-12重庆医科大学附属第二医院神经内科门诊或住院的MCI组36例,AD组25例,CN组30例。很可能AD的纳入标准采用美国国立神经病、语言障碍和卒中研究院-阿尔茨海默病和相关疾病学会的诊断标准;MCI组的纳入标准:采用Petersen等制定的标准;CN组的纳入标准:为同期本科的住院人员并除外可能影响认知功能的疾病。所有入选病例均获得本人和（或）法定监护人同意。神经心理学检查采用MMSE。经常规腰椎穿刺术取CSF约3ml,立即存于-70℃冰箱待测。应用肌电-诱发电位仪的听觉oddball程序检测P300。进行SPECT局部脑血流灌注显像,半定量分析各脑区血流灌注情况。用酶联免疫吸附试验测定各组CSF中GAP-43、Aβ1-42含量并比较。结果:（1）本实验入选者其性别、平均年龄、文化程度的构成,经统计学检验无显著性差异;与CN组及MCI组相比,AD组MMSE评分显著降低;与CN组相比,MCI组MMSE评分明显降低。（2）与CN组相比,MCI组与AD组P300潜伏期均有不同程度的延长;同MCI组和CN组相比,AD组P300波幅显著降低;P300波幅在MCI组与CN组之间差异无显著性。（3）AD组在双侧额叶、顶叶、颞叶、海马、左侧丘脑及扣带回RAR均较CN组有不同程度降低;MCI组仅在双侧颞叶、左侧海马及扣带回RAR减低具有统计学意义,且扣带回下降更明显。（4）AD组CSF中GAP-43含量明显高于CN组及MCI组,MCI组同CN组相比虽有所增高,但无显著意义。AD及MCI组CSF中Aβ1-42浓度同CN组相比均不同程度降低,且AD组降低更显著。结论:（1）SPECT检测在双侧颞叶、扣带回及左侧海马区rCBF显著降低可作为预测CN到MCI转化的灵敏指标;并可在一定程度上客观地反映AD、MCI及CN组之间的动态变化以及认知损害的严重程度。（2）对认知功能损害的监测,P300潜伏期的延长早于波幅的降低,是反映AD患者亚临床认知功能损害的敏感指标。检测P300潜伏期对早期发现AD可能有一定价值并可作为观察疗效的一个客观指标。（3）CSF中Aβ1-42、GAP-43的含量变化在一定程度上反映了从正常认知进展到MCI及AD的不同病理进程,可作为提高早期AD预测的生物学标志之一,而且可对治疗效果进行监测。（4）MMSE、rCBF、P300以及CSF中Aβ1-42、GAP-43的含量检查对于MCI、痴呆的早期诊断和客观反映痴呆严重程度具有重要价值,而不同指标的联用可提高AD的早期诊断。目的:观察地黄益知浸膏（DiHuang YiZhi JinGao,DHYZJG）对老年性痴呆（Alzheimer’s Disease,AD）大鼠学习记忆能力及中枢胆碱能系统及其信号转导通路功能紊乱、突触可塑性的影响,探索其防治AD的可能机制,并为其治疗AD提供实验室依据。方法:（1）DHYZJG由熟地黄、山茱萸、石菖蒲、远志、巴戟天等8味中药组成,在重庆中药研究院制成中药流浸膏（1g流浸膏相当于2g生药含量）。动物实验前对DHYZJG进行了急性毒理实验。（2）将90只雄性SD大鼠随机分为6组,右侧海马注射Aβ25-35造成AD模型,用电脑控制的穿梭箱及水迷宫检测大鼠的学习记忆能力。（3）通过苏木精-伊红、尼氏染色,观察各组大鼠海马CA1区的病理学变化。（4）应用Hestrin碱性羟胺比色法检测Ach的含量;应用微量羟胺比色法测定AChE活性;应用RT-PCR法检测M-AchR M1、N-AchR a4、a7mRNA的表达水平;应用Western-blot法测定CREB、GSK-3β的蛋白磷酸化水平。并以Donepezil为对照,探讨DHYZJG的治疗效果及其作用机理。（5）应用免疫荧光技术,采用激光共聚焦扫描仪检测AD大鼠海马CA1区GAP-43、PSD-95的表达;应用电镜和图象分析系统测量AD大鼠海马CA1区突触界面结构参数（突触数密度、突触后膜致密物厚度、突触活性区长度、突触界面曲率）;并观察DHYZJG对AD大鼠海马突触可塑性的影响。结果:（1）在治疗4周后:Model组大鼠穿梭箱及水迷宫测试提示学习、记忆能力下降,DHYZJG可剂量依赖性的改善Model组大鼠的学习、记忆能力。（2）在治疗4周后:HE和尼氏染色显示,与Sham组相比,Model组大鼠右侧海马CA1区细胞脱失明显,出现核深染、固缩,胞浆内尼氏小体模糊不清或消失;DHYZJG High、Medium组神经细胞排列较整齐、结构较完整,神经元变性、坏死程度均较Model组轻。Nissl染色后,Model组大鼠右侧海马CA1区细胞数同Sham组相比显著减少,而DHYZJG High、Medium组则显著增多,并呈剂量依赖性。（3）在治疗4周后:与Sham组相比,Model组大鼠右侧海马Ach含量、AChE活性显著降低;与Model组相比,DHYZJG High、Medium组Ach含量不同程度的升高,AchE酶活性显著上调。（4）在治疗4周后:与Sham组相比,Model组大鼠右侧海马pCREB Ser133和pGSK-3βSer9蛋白表达显著降低,CREB和GSK-3β蛋白表达无明显下降;与Model组相比,DHYZJG High组大鼠右侧海马pCREB Ser133和pGSK-3βSer9蛋白含量均不同程度增高,但GSK-3β蛋白表达明显下降。（5）在治疗4周后:与Sham组相比,Model组大鼠右侧海马N-AchR a7 mRNA含量明显增高,M-AchR M1、N-AchR a4 mRNA表达无显著差异;与Model组相比,DHYZJG High组大鼠右侧海马M-AchR M1、N-AchR a7 mRNA表达水平均明显增高。（6）在治疗4周后:同Sham组相比,Model组大鼠右侧海马CA1区神经元突触Nv、PSD的厚度、突触活性区长度均显著下降,PSD-95表达显著降低,GAP-43表达明显增高;DHYZJG High组大鼠右侧海马CA1区神经元突触的Nv、PSD的厚度、突触活性区长度显著恢复,PSD-95、GAP-43的荧光强度比Model组均有不同程度增高,突触界面曲率各组间无显著差异。结论:（1）DHYZJG可剂量依赖性的改善AD大鼠学习记忆等认知功能障碍;（2）DHYZJG能剂量依赖性的减轻AD大鼠海马区的神经元坏死和凋亡程度,从而发挥神经保护作用;（3）AD大鼠可能是由于中枢胆碱能系统功能整体水平受损而使其失代偿;DHYZJG可剂量依赖性的改善AD大鼠中枢胆碱能系统的功能紊乱,使其达到新的动态平衡,也体现了中药的多靶点、整体调整特点;（4）AD组大鼠海马突触传递功能受阻,神经元间的信息传递、加工和储存受障,而DHYZJG可促进突触重构,调节突触可塑性,改善AD海马受损神经元轴突的生长和促进中枢神经系统反应性功能重建,最终改善认知功能障碍。
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