电纺纤维膜的制备及其对小白鼠皮肤创面保护的作用

论文摘要

研究目的：烧伤或者慢性难愈性创面等多伴有不同程度的皮肤缺失,治疗中常遇到创面保护不足导致的愈合缓慢,皮肤附件破坏,以致皮肤创面愈合后质量较差,因此对于慢性创面的保护一直是临床中的难点。而目前临床上所用创面敷料大致分为三类：天然材料类、动物组织衍生物制品和合成高分子材料类,然而天然材料类敷料及动物组织衍生制敷料都有不同程度的来源不足、不易储存等缺点,而合成高分子材料中的组织工程敷料—PCL （polycaprolactone）-明胶电纺纤维膜,作为一种高分子材料构建的三维多孔仿生支架,不仅具备优越的机械性能且具有一定的生物学活性,是新一代的人工敷料。该电纺膜具有高孔隙率和高比表面积,还可以作为生长因子的载体将药物在伤口处释放以达到保护创面促进愈合的目的。本研究课题的目的是利用高压静电纺织技术制备具有生物活性的人工敷料并评价这种新型敷料在皮肤伤口愈合中的作用。研究方法：1.利用全骨髓培养法分离BMSCs（bone marrow mesenchymal stem cells）,通过成骨诱导分化从分化潜能方面鉴定BMSCs。2.利用静电纺丝技术制备PCL、PCL-明胶电纺纤维膜,利用CFDA染色、MTT法研究PCL、PCL-明胶电纺纤维膜对BMSCs黏附、增殖的影响。3.建立昆明小鼠伤口创面模型,将吸附了生长因子的膜应用于伤口处,观察伤口愈合情况。利用像素计量方法计算伤口面积大小,利用HE染色观察伤口愈合处皮肤的组织学特征,采用SPSS15.0对统计数据进行分析。研究结果：1.溶质质量分数为15%、喷射电压为10kv、溶液推进速度为0.75ml/h、针头与接受盘之间的距离为15cm时能得到纤维直径较均匀的PCL膜；PCL溶液（质量分数为12.5%）与明胶溶液（质量分数为2.5%）体积比4：1、喷射电压为10kv、溶液推进速度为0.75ml/h、针头与接受盘之间的距离为15cm时能得到纤维直径较平均的PCL-明胶膜。2.PCL-明胶纤维膜上的BMSCs在第一天时能更好的黏附于膜表面,伪足数大于3,而PCL膜上的BMSCs细胞伪足数基本小于3；在19天时,PCL-明胶膜上的细胞比PCL膜上的细胞更早达到生长平台期,但迟于空白对照组的13天（正常12孔板表面）。4.动物实验中,在愈合中期的11天时,PCL、PCL-明胶膜与aFGF各处理组相比于空白对照组有更多的愈合面积,同时组织学显示处理组新生组织有更多的毛囊形成和胶原沉积。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文縮写词简表
• 第一部分：前言
• 第二部分：电纺纤维材料的制备及其生物性能研究
• 第一章 实验材料
• 2.1.1 实验试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 第二章 实验方法
• 2.2.1 电纺纤维膜的制备
• 2.2.2 人骨髓间充质干细胞的分离培养
• 2.2.3 人骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化
• 2.2.4 电纺纤维膜对细胞黏附的影响
• 2.2.5 电纺纤维膜及αFGF对细胞增殖的影响
• 第三章 实验结果
• 2.3.1 静电纺丝纤维膜的制备
• 2.3.2 利用全骨髓培养法分离得到的骨髓间充质干细胞结果
• 2.3.3 人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化结果
• 2.3.4 电纺纤维膜对BMSCs细胞黏附的影响结果
• 2.3.5 电纺纤维膜对BMSCs细胞增殖的影响结果
• 第四章 实验讨论
• 2.4.1 利用静电纺丝技术制备电纺纤维膜
• 2.4.2 全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞
• 2.4.3 电纺纤维膜对细胞黏附的影响
• 2.4.4 电纺纤维膜对细胞生长的影响
• 2.4.5 电纺纤维膜对细胞增殖的影响
• 第三部分：电纺纤维膜对小白鼠皮肤创面保护的作用
• 第一章 实验材料
• 3.1.1 实验试剂
• 3.1.2 实验仪器
• 第二章 实验方法
• 3.2.1 膜处理
• 3.2.2 伤口造模
• 3.2.3 伤口处理
• 3.2.4 各伤口样本分布
• 3.2.5 伤口愈合情况检测
• 3.2.6 愈合伤口组织的石蜡切片以及HE染色
• 第三章 实验结果
• 第四章 实验讨论
• 第四部分：结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间所取得的研究成果