天麻镇眩颗粒应用于梅尼埃病的药效学、临床研究及对AQP-1表达的影响

论文摘要

[背景]梅尼埃病是以膜迷路积水为基本病理改变的特发性内耳疾病,以发作性眩晕、耳聋和耳鸣为临床特征。发病原因至今尚无定论,因此临床治疗非常困难,迄今很难治愈。目前认为,大部分梅尼埃病患者依靠药物治疗,约有1/3的人在药物治疗失败后求助外科手术治疗。而外科手术治疗方法存在术后复发、深度耳聋、面神经瘫痪和颅内并发症等风险。陈宝田教授经过数十年临床经验总结出的一个经验方一天麻镇眩颗粒,在临床上治疗梅尼埃病取得了良好的效果。近几年陈教授经过临床实践加上名贵中药天麻,使该药使用更加广泛。目前中药市场上治疗梅尼埃病的中成药甚少,因此一种安全有效的治疗药物正是梅尼埃病患者和市场所急需的,一旦天麻镇眩颗粒开发成功,将会产生巨大的社会、经济效益。水通道蛋白是一种单纯转运水分子的跨膜转运蛋白,在其辅助下水分子可实现快速的跨膜转运。在目前的研究中水通道蛋白1（AQP-1）已经发现是水通道蛋白家族成员中在内耳表达最为丰富的一个。我们研究AQP-1的目的有二:一、为天麻镇眩颗粒治疗梅尼埃病找到可靠的理论根据;二、探索梅尼埃病的发病机制。第一部分实验部分第一章天麻镇眩颗粒镇静催眠作用的实验研究目的研究天麻镇眩颗粒的镇静、催眠作用。方法采用天麻镇眩颗粒对小鼠自发活动的影响、对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期和时间的影响,研究受试药的镇静催眠作用。结果天麻镇眩颗粒可显著减少中剂量组、高剂量组小鼠自发活动次数（P＜0.01）,缩短中剂量组、高剂量组小鼠入睡潜伏期（P＜0.01）,延长中剂量组（P＜0.01）、高剂量组（P＜0.05）小鼠睡眠时间。结论天麻镇眩颗粒具有显著的镇静、催眠作用.第二章天麻镇眩颗粒利尿作用的实验研究目的研究天麻镇眩颗粒的利尿作用。方法采用称重法研究受试药对小鼠的利尿作用;采用代谢笼法研究受试药对大鼠的利尿作用。结果与空白对照组相比天麻镇眩颗粒中剂量、高剂量可显著使小鼠尿量增加（中剂量P＜0.01;高剂量P＜0.05）;与空白对照组比较,天麻镇眩颗粒中剂量可使大鼠尿量显著增加（P＜0.01）。结论天麻镇眩颗粒具有显著的利尿作用。第三章天麻镇眩颗粒镇吐作用的实验研究目的研究天麻镇眩颗粒的镇吐作用。方法采用硫酸铜和顺铂致家鸽呕吐的模型,观察受试药的镇吐作用。结果天麻镇眩颗粒中、高剂量能延长硫酸铜所致家鸽呕吐潜伏期（P＜0.05）,同时中剂量能延长顺铂致鸽子呕吐模型的呕吐潜伏期（P＜0.05）,并能减少硫酸铜所致鸽子模型中、高剂量的呕吐次数（P＜0.05,P＜0.01）和顺铂所致家鸽中剂量的呕吐次数（P＜0.01）。结论天麻镇眩颗粒具有镇吐作用。第四章天麻镇眩颗粒对豚鼠脑干诱发电位的影响目的探索天麻镇眩颗粒对膜迷路积水豚鼠脑干诱发电位各指标的影响。方法所有豚鼠给药方式均为灌胃。天麻镇眩颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组均给予天麻镇眩颗粒;阳性对照组给予晕复静片;空白模型组、假手术组给予生理盐水。每日一次,共2周。最后一次给药后每只豚鼠做脑干诱发电位,记录Ⅰ波、Ⅲ波和Ⅴ波的潜伏期,以Ⅲ波的反应阈测定豚鼠的听阈值。结果波Ⅰ:服药后与空白对照组相比,中剂量、高剂量组及假手术组潜伏期显著缩短,且有统计学意义（P＜0.05）,而阳性对照组无显著改变（P＞0.05）;波Ⅲ:服药后与空白对照组相比,中剂量组、高剂量组和假手术组潜伏期显著缩短,且有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01）,而阳性对照组无显著改变（P＞0.05）;波Ⅴ:服药后与空白对照组相比,中剂量组、高剂量组及假手术组潜伏期显著缩短,且统计学处理后有意义（P＜0.05）,而阳性对照组无显著改变（P＞0.05）;豚鼠听阈值:服药后与空白对照组相比中剂量组豚鼠阈值显著下降,且统计学处理后有意义（P＜0.05）。结论天麻镇眩颗粒可以使豚鼠脑干诱发电位波Ⅰ、波Ⅲ、波Ⅴ潜伏期显著缩短,并且可以使豚鼠听力得以改善。第五章天麻镇眩颗粒对实验性膜迷路积水豚鼠的影响目的讨论天麻镇眩颗粒对膜迷路积水模型豚鼠耳蜗切片的影响。方法做完脑干诱发电位后,立即开始耳蜗冰冻切片的制作。每组动物耳蜗切片中随机抽取1张,在200×视野下观察豚鼠耳蜗的积水情况,均选取耳蜗第三回作为分析点。将耳蜗切片分为无积水、轻度积水、中度积水和重度积水四种程度,最后将各组积水程度进行比较。结果服用天麻镇眩颗粒后六组豚鼠积水程度差异有统计学意义（X2=25.69,P=0.00）,其中空白对照组积水程度最重,假手术组积水程度最轻,而与空白对照组相比中剂量及高剂量组积水程度均减轻。结论天麻镇眩颗粒可以使膜迷路积水豚鼠的积水程度显著改善。第六章天麻镇眩颗粒对膜迷路积水豚鼠AQP-1表达的影响目的研究天麻镇眩颗粒对膜迷路积水豚鼠耳蜗AQP-1表达的影响,进一步探索膜迷路积水的发生机制。方法44只豚鼠随机分为4组:天麻镇眩颗粒高剂量组,天麻镇眩颗粒低剂量组,模型对照组和假手术组。造模成功后高剂量组和低剂量组均给予天麻镇眩颗粒灌胃（高剂量组每次6.89g/kg、低剂量组每次3.49g/kg）;空白对照组和假手术组给予生理盐水灌胃。每日一次,共2周。最后一次给药后立即开始耳蜗冰冻切片的制作,使用免疫组织化学DAB染色术检测膜迷路积水豚鼠耳蜗AQP-1的表达情况。DAB染色以光学显微镜下出现棕色颗粒沉淀为阳性。每组应用图像处理软件ImageTool（Version2.0）对免疫组化染色结果进行分析,对染色面积进行量化比较,计算第三转阳性面积与该转螺旋韧带的面积比作为比较值。结果假手术组、低剂量组和空白对照组相比AQP-1的表达没有差异（P＞0.05）,高剂量组和空白对照组相比AQP-1的表达显著上调且有统计学意义（P＜0.05）。结论天麻镇眩颗粒可以使膜迷路积水豚鼠耳蜗AQP-1的表达上调,从而促进内淋巴囊内积水的吸收。第二部分临床部分目的观察天麻镇眩颗粒治疗梅尼埃病患者三大主要症状的改善程度及治疗后的临床疗效。方法所有病例均符合《耳鼻咽喉科学》梅尼埃病的诊断标准同时符合中医眩晕的诊断标准。患者来源于南方医院中医科、神经内科、耳鼻喉科的门诊和病房、广州陆军总院耳鼻喉科门诊和病房,河南大学医学院第一附属医院耳鼻喉科门诊和病房,性别不限,年龄在18岁—70岁,共62例,随机分为天麻镇眩颗粒组（简称观察组）和晕复静治疗组（简称对照组）,观察组31例,对照组31例。两组病例在性别（x2=0.258,P=0.611）、年龄（t=0.0.272,P=0.736）、病程（t=0.103,P=0.812）经统计学处理无差异。两组在入组时均做纯音测听,并计算0.25KHz、0.5KHz、1KHz、2KHz、4KHz听阈平均值,两组听阈平均值经统计学处理差异无显著（t=0.221,P=0.241）。观察组给予天麻镇眩颗粒每天45g,分三次口服;对照组以晕复静片,每次2片（每片含量为0.1g）,一日三次。疗程均为2周。一个疗程不愈或复发者可再次按疗程服用。2周后对两组近期疗效及眩晕、耳鸣2个主要症状改善程度进行比较;6个月后对每个患者进行听力（纯音测听）测定并进行治疗前后比较。结果2周后:眩晕症状改善程度观察组优于对照组（Z=2.202,P=0.028）;耳鸣改善程度观察和对照组没有显著差异（Z=1.607,P=0.096）;按照中医眩晕的疗效标准,观察组的有效率为96.5%,对照组的有效率为90%,两者之间经统计学处理存在显著差异（Z=2.506,P=0.012）。6个月后:听阈值改善有差异,观察组优于对照组（F=7.160,P=0.010）。结论天麻镇眩颗粒在近期疗效、眩晕症状程度及听力改善上优于晕复静,但是在改善耳鸣症状上两者疗效相当,因此,天麻镇眩颗粒有开发价值。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 实验部分
• 第一章 天麻镇眩颗粒镇静催眠作用的实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 天麻镇眩颗粒利尿作用的实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 天麻镇眩颗粒镇吐作用的实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 第四章 天麻镇眩颗粒对豚鼠脑干诱发电位的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第五章 天麻镇眩颗粒对实验性膜迷路积水豚鼠的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第六章 天麻镇眩颗粒对膜迷路积水豚鼠AQP-1表达的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 临床部分
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 综述
• 博士期间发表文章
• 致谢