软骨多糖抑制乳腺癌细胞转移的机制研究

论文摘要

本课题采用碱提-酶解法从猪软骨中提取短链多糖,以该软骨多糖为研究对象,在前期研究的工作基础上,从体外和体内两个方面研究软骨多糖抗肿瘤生长转移的功效,并进一步探讨软骨多糖抗肿瘤转移的作用机制。以MCF-7乳腺癌细胞为体外模型,MTT法和免疫细胞化学法分别检测软骨多糖在体外对癌细胞的抑制作用和对癌细胞中MMP-9和LNR1表达的影响,结果显示,软骨多糖体外能够抑制MCF-7生长,并影响MCF-7细胞中MMP-9和LNR1的表达。建立615小鼠乳腺癌Ca761肺转移模型,作为体内模型,用软骨多糖腹腔注射为治疗,生理盐水腹腔注射做对照,检测小鼠瘤重抑制率、胸腺指数和转移抑制率,软骨多糖体内抗肿瘤生长转移效果明显。HE检测肺部转移情况。明胶酶谱检测瘤组织中MMP-2和MMP-9的活力变化,治疗组瘤组织中MMP-2和MMP-9的活力明显低于对照组。酶标双抗体夹心ELISA法测定治疗组和对照组小鼠血清中MMP-9和TNF-α的含量及变化,治疗组小鼠血清中MMP-9和含量TNF-α明显低于对照组（P＜0.05）。免疫组化方法分别检测治疗组和对照组瘤组织中纤维粘连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）、αvβ3整合素和层粘连蛋白受体1（LNR1）的含量变化,治疗组癌组织中FN和LN含量和对照组相比明显降低,而αvβ3整合素和LNR1的表达率则升高。由结果可以看出软骨多糖能够抑制乳腺癌细胞的转移,其机制可能与影响FN、LN、αvβ3整合素、LNR1、TNF-α、MMP-2和MMP-9表达有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 肿瘤及乳腺癌的发展
• 1.1.1 肿瘤的简介
• 1.1.2 乳腺癌的发展现状
• 1.1.3 乳腺癌的治疗现状
• 1.2 多糖的相关知识
• 1.2.1 多糖的概述
• 1.2.2 多糖的生理活性
• 1.2.3 多糖的提取
• 1.3 多糖抗癌的研究进展
• 1.3.1 多糖抗癌研究的概述
• 1.3.2 软骨类物质抗癌的研究进展
• 1.4 细胞转移
• 1.4.1 细胞转移的概述
• 1.4.2 细胞的粘附与转移
• 1.4.3 细胞凋亡与肿瘤转移之间的相关性
• 1.4.4 癌细胞转移机制
• 1.4.5 瘤细胞发生转移基本步骤
• 1.4.6 癌细胞转移的五大学说
• 1.4.7 乳腺癌细胞转移相关蛋白
• 1.5 本课题的研究意义及研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 试验动物和细胞
• 2.2 主要方法
• 2.2.1 软骨多糖的提取
• 2.2.2 细胞系及细胞培养
• 2.2.3 MTT法检测多糖对MCF-7细胞抑制的活性
• 2.2.4 免疫细胞化学技术
• 2.2.5 Ca761乳腺癌动物模型的建立及观察指标
• 2.2.6 HE染色
• 2.2.7 酶标双抗体夹心ELISA法
• 2.2.8 明胶酶谱法
• 2.2.9 免疫组织化学（S-P法）
• 3 结果与讨论
• 3.1 软骨多糖抑制乳腺癌细胞MCF-7的活性（MTT）
• 3.2 免疫荧光
• 3.2.1 MMP-9在软骨多糖作用下的表达变化
• 3.2.2 LN受体1在软骨多糖作用下的表达变化
• 3.3 软骨多糖对实体瘤Ca761的影响及指标观察
• 3.3.1 软骨多糖对小鼠乳腺癌Ca761的瘤重抑制率
• 3.3.2 软骨多糖对小鼠乳腺癌Ca761的肺转移抑制作用
• 3.4 小鼠肺部转移观察
• 3.5 软骨多糖对小鼠血清TNF-α的影响
• 3.6 软骨多糖对小鼠血清MMP-9的影响
• 3.7 MMPs活性
• 3.8 FN和 LN
• 3.9 αvβ3整合素和LNR1
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 论文发表情况
• 8 致谢