米尔贝肟的非临床安全性评价及对犬蛔虫体外作用的研究

论文摘要

米尔贝肟（milbemycin oxime）是从链霉菌属中分离而得到的大环内酯类抗生素,主要由米尔贝霉素A3肟和米尔贝霉素A4肟按2:8比例组成的混合物。为了探讨其安全性,本研究利用小鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠长期毒性试验等方法对米尔贝肟进行了药物毒理学安全性评价。小鼠急性毒性试验结果表明,米尔贝肟对昆明系小白鼠毒性很低,并且有显著的性别差异,其对雄性和雌性小白鼠的LD50分别为1832 mg·kg-1和727 mg·kg-1,95%可信限为1637.57～2022.08 mg·kg-1和603.95～868.96 mg·kg-1;Ames试验结果表明,各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照组回变菌落数的2倍,亦无剂量——反应关系。在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,米尔贝肟未引起骨髓嗜多染红细胞微核率的增加。在精子畸形试验中,各剂量组精子畸形率差异不显著,亦无剂量——反应关系。采用Wistar大鼠进行米尔贝肟的三个月慢性毒性实验,给药后一个月,高剂量组大鼠出现精神沉郁,但给药停止后症状随之消失,其他组动物外观体征和行为活动未发生明显变化;血液学指标各给药组均无明显差异;血液生化指标均在正常范围内;高剂量组肺脏、肝脏、小肠、脾脏出现轻微病理变化,但在恢复期均恢复正常。其他组织,未见异常。为满足临床应用的需要,本文就米尔贝肟对犬蛔虫的体外作用进行了研究。从哈尔滨周边地区杂种犬小肠分离犬蛔虫成虫,观察在10-4、10-5、10-6、10-7、10-8g·mL-1浓度下,给药后4、8、12、24、48h,米尔贝肟对犬蛔虫成虫的作用。结果表明,10-4、10-5、10-6g·mL-1剂量组米尔贝肟对犬蛔虫虫体抑制作用的有效率均达到100%,而10-7、10-8g·mL-1剂量组的有效率为66%,药物对虫体活力的影响程度与药物剂量有很大的关系。按照上述浓度进行药物对犬蛔虫卵作用试验,结果表明,随着药物浓度增大,虫卵孵育所需时间延长,Ⅴ期幼虫所占比例也有所下降;将与药物作用后并发育为Ⅴ期的蛔虫卵对小鼠进行感染,结果显示米尔贝肟能明显减弱虫卵的感染力。正常发育的感染性犬蛔虫卵与10-5、10-6、10-7g·mL-1米尔贝肟作用后,灌服小鼠（约1000个虫卵）。感染3d、5d后对小鼠进行剖检,观察肺脏损害情况并进行病理观察。结果表明,感染3d和5d后,灌服低浓度药物(10-7g·mL-1)且作用12h虫卵的小鼠,肺脏呈明显病变。而高浓度药物(10-6、10-5g·mL-1)作用相同时间,肺脏病变轻微甚至无变化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 米尔贝肟的研究进展
• 1.1.1 米尔贝肟的发现及发展
• 1.1.2 米尔贝肟的理化性质
• 1.1.3 米尔贝肟在动物机体中的代谢分布
• 1.1.4 米尔贝肟的作用机制
• 1.1.5 米尔贝肟的应用
• 1.1.6 米尔贝肟的毒性研究
• 1.2 药物的毒理学安全性评价
• 1.2.1 药物毒理学安全性评价的目的
• 1.2.2 药物毒理学安全性评价程序
• 1.2.3 药物毒理学发展趋势与展望
• 1.3 本研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验试剂
• 2.1.2 溶液配制
• 2.1.3 试验动物
• 2.1.4 试验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 米尔贝肟的毒理学试验
• 2.2.2 米尔贝肟对犬蛔虫体外作用的研究
• 3 结果
• 3.1 米尔贝肟的毒理学试验结果
• 3.1.1 米尔贝肟的经口急性毒性试验
• 3.1.2 米尔贝肟的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames 试验）
• 3.1.3 米尔贝肟的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
• 3.1.4 米尔贝肟的小鼠精子畸形试验
• 3.1.5 米尔贝肟对Wistar 大鼠的长期毒性试验
• 3.2 米尔贝肟对犬蛔虫体外作用的研究
• 3.2.1 米尔贝肟对犬蛔虫卵的作用
• 3.2.2 米尔贝肟对感染性犬蛔虫卵的作用
• 3.2.3 米尔贝肟对犬蛔虫成虫的作用
• 4 讨论
• 4.1 米尔贝肟的毒理学研究
• 4.1.1 急性毒性试验
• 4.1.2 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames 试验）
• 4.1.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
• 4.1.4 小鼠精子畸形试验
• 4.1.5 大鼠长期毒性试验
• 4.2 米尔贝肟对犬蛔虫体外作用的研究
• 4.2.1 受精犬蛔虫卵的获取方式
• 4.2.2 米尔贝肟对犬蛔虫卵的体外作用
• 4.2.3 米尔贝肟对感染性犬蛔虫卵的作用
• 4.2.4 犬蛔虫成虫的体外培养
• 4.2.5 犬蛔虫体外试验药液的配制
• 4.2.6 米尔贝肟对犬蛔虫成虫的体外作用
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士期间发表的学术论文