膜反应器脱氮除磷及细菌16S rDNA多样性研究

膜反应器脱氮除磷及细菌16S rDNA多样性研究

论文摘要

畜禽养殖废水中富含氮磷、有机物、高悬浮物,臭味大,是一种高浓度有机废水。试验采用一体式膜生物反应器(MBR)在不同DO浓度和水力停留时间条件下对畜禽养殖废水处理效果进行研究,确定最佳的实验参数;并运用分子生物学方法对其细菌多样性进行研究,分析该条件下的菌落结构以及优势菌种。研究结果表明:(1)DO浓度控制在0.5-4.5mg/L之间,随着DO从0.5mg/L增到1.5mg/L,NH3-N、TN、TP、COD的去除率均相应增加;当DO从1.5mg/L增到4.5mg/L,除COD去除率有显著的增加外,NH3-N(DO为2.5mg/L去除率达到最大值)、TN、TP的去除率均减小。DO为1.5m/L时,NH3-N、TN、TP、COD的去除率分别为93.03%、94.87%、67.62%、91.16%。(2)HRT控制在2-8小时,当HRT从2小时增加到8小时,NH3-N、TN、TP、COD的去除率逐渐增加;当HRT从8小时增加到12小时,TN、TP的去除率稳定在较高水平,TP的去除率呈下降趋势,而COD的去除率仍持续增加。HRT为8小时时,NH3-N、TN、TP、COD的去除率分别为96.33%、94.12%、63.12%、92.18%。(3)确定了当DO为1.5mg/L、HRT为8h时,膜生物反应器内存在好氧、缺氧、厌氧的环境,对畜禽废水中的脱氮除磷达到了较好的效果,同时对COD的出率也保持在较高的水平。(4)对DO为1.5mg/L、HRT为8h条件下的膜生物反应器的细菌多样性进行研究分析,构建16S rDNA克隆文库,文库库容值为75.9%。对确认成功的29个克隆子用HinfⅠ、HaeⅢ、AluⅠ、MspⅠ4种限制酶进行限制酶切多态性分析,产生出12种不同的组合酶切图谱类型。文库的统计分析Shannon—Wiener为2.1811,Simpson为0.8585,均匀度为0.8777,丰富度为3.2667。(5)根据16S rDNA PCR-RFLP分析结果,选择了12个样品送上海生物工程技术服务有限公司测序。把测序结果通过NCBI,用Blast工具进行相似序列搜索和比对,确定其所属类别。12个克隆子通过blast找到了相对应分类,且相似度较高。测序样品中4个序列属于γ-proteobacteria,3个序列属于β-proteobacteria。其中第14号、26号克隆子分别与Nitrosomonas communis和Nitrosomonas europaea相似度为99%,4号克隆子属于Flavobacteria,14号克隆子属于Nitrospira,有3个克隆子与未培养细菌相似度在91%-97%之间。由此可以分析,系统中的优势菌群为γ-proteobacteria和β-proteobacteria。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 文献综述
  • 1.1 畜禽养殖业发展现状
  • 1.1.1 畜禽养殖业污染现状
  • 1.1.2 畜禽养殖废水处理技术现状
  • 1.2 膜生物反应器在废水处理中的运用
  • 1.2.1 膜生物反应器特点
  • 1.2.2 膜生物反应器研究进展
  • 1.2.3 膜生物反应器脱氮除磷研究进展
  • 1.2.4 膜生物反应器在畜禽养殖废水处理中的运用
  • 1.3 分子生物技术在废水处理中的运用
  • 1.3.1 16S rDNA-PCR
  • 1.3.2 核酸探针分子杂交
  • 1.3.3 变性梯度凝胶电泳(TGGE/DGGE)图谱
  • 1.3.4 微生物醌指纹法
  • 1.3.5 ERIC-PCR
  • 1.4 废水中菌种的研究进展
  • 1.5 本研究目的及意义
  • 2 实验材料与方法
  • 2.1 材料、试剂及仪器
  • 2.1.1 供试污泥
  • 2.1.2 一体式MBR实验装置与设备
  • 2.1.3 实验用水
  • 2.1.4 分子生物学技术所用主要试剂及仪器设备
  • 2.2 研究方法
  • 2.2.1 一体式MBR对畜禽废水的处理效果的研究
  • 2.2.2 总DNA的提取
  • 2.2.3 提取DNA的测定
  • 2.2.4 16S rDNA的扩增
  • 2.2.5 PCR产物的纯化
  • 2.2.6 16S rDNA克隆文库的构建
  • 2.2.7 克隆文库统计学分析
  • 2.2.8 测序及系统发育分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 畜禽废水的处理效果
  • 3.1.1 膜反应器的启动
  • 3.1.2 膜反应器的运行研究
  • 3.2 样品DNA提取结果
  • 3.2.1 DNA产物的纯度鉴定
  • 3.2.2 DNA电泳检测
  • 3.3 16S rDNA的扩增
  • 3.4 样品16S rDNA文库构建
  • 3.5 限制酶切多态性分析
  • 3.6 16S rDNA基因序列的相似性比对和系统发育分析
  • 4 讨论与结论
  • 4.1 畜禽废水污泥中细菌DNA提取分析
  • 4.2 膜生物反应器对畜禽废水脱氮出磷的分析
  • 4.3 细菌16S rDNA文库多样性分析
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录: 攻读硕士学位期间发表的论文
  • 相关论文文献

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