槟榔碱对结肠平滑肌细胞内游离钙离子浓度的影响

论文摘要

目的:1.建立体外培养鼠结肠平滑肌细胞的方法。2.采用激光共聚焦显微技术观察了氢溴酸槟榔碱（Ah）促进培养的结肠平滑肌细胞收缩作用及对胞内游离Ca2+浓度的影响。 方法:1.应用酶解法分离大鼠的结肠平滑肌细胞,用含10%胎牛血清的DMEM液进行鼠结肠平滑肌细胞的原代培养及传代,并以免疫组织化学对其进行鉴定。2.培养大鼠结肠平滑肌细胞分为Ah刺激组、正常对照组、Ach刺激组、阿托品预处理组,应用特异性Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离胞内游离Ca2+浓度和细胞收缩率。 结果:1.新鲜分离的结肠平滑肌细胞呈梭形,核居中。培养24小时后细胞开始贴壁,3-5天后开始增殖,14天后细胞密集,呈峰谷样生长。细胞经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,确定为平滑肌细胞。2.Ah刺激组在加药后短时间内胞内钙离子浓度迅速有个升高,出现一个波峰,FI基础值与峰值有差异,P<0.05,接着胞内钙离子浓度再缓慢攀升,在484.0172+47.55S达到高峰,而后有一个较长时间的平台期,在1400S左右恢复至静息水平,FI基础值与峰值有显著差异,P<0.01。细胞收缩百分数为20.70±0.072%。正常对照组细胞未发生自主性收缩,因指示剂的衰减,FI有递减的趋势;Ach刺激组在加药后表现趋势与Ah刺激组一致,短时间内胞内钙离子浓度迅速升高,形成个小的波峰,FI基础值和峰值差异有显著性,P<0.01。而后胞内钙离子浓度缓慢攀升,在600s左右达到高峰,而后有个较长时间的平台期。FI基础值与峰值差异有显著性,P<0.001。经阿托品预孵育处理后

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 论文
• 第一部分 结肠平滑肌细胞的分离、培养、鉴定
• 第二部分 槟榔碱促结肠平滑肌细胞收缩及升高胞内钙离子浓度的实验
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 综述：槟榔药理作用研究进展
• 附录
• 论文独创性声明
• 论文使用授权声明