论文摘要
目的:构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,对其进行序列测定,将它们分别转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的cyclinD1及Cathepsin B 基因的mRNA表达的影响方法:抽提总RNA;根据基因库RhoC mRNA 序列设计合成引物,采用RT 一PCR 法扩增编码RhoC 的基因阅读框,经胶回收并纯化,将RhoC基因定向克隆到pcDNA3.1/Hygro（+） 真核表达载体,构建正、反义重组质粒,筛选阳性重组子,并经双酶切鉴定;最后对重组子进行序列测定。以脂质体转染人胆管癌细胞QBC939,挑选潮霉素抗性克隆,RT-PCR 检测潮霉素抗性片段在转染细胞中的表达,检测细胞生长曲线,RT-PCR 检测cyclinD1 和CathepsinB 在QBC939 细胞、转染空载体的QBC939 细胞、转染正义RhoC 的QBC939 细胞、转染反义RhoC 的QBC939 细胞的mRNA 相对表达量结果:重组质粒所包含的RhoC基因片段经过酶切以及序列测定分析表明所克隆的基因是编码RhoC基因的片段。RT-PCR 显示转染细胞中潮霉素抗性基因片段有表达,转染成功,与QBC939 及空载体（QBC939-V）对照细胞相比,正义RhoC cDNA 转染细胞（QBC939-S）体外生长较快,反义RhoCcDNA 转染细胞（QBC939-AS）体外生长较慢,cyclinD1 和Cathepsin B 的表达在QBC939-AS与对照组相比减少（p<0.05）,cyclinD1 和Cathepsin B 的表达在QBC939-S 与对照组相比增加（p<0.05）结论:成功构建正、反义RhoC基因的pcDNA3.l/Hygro（+）真核表达质粒。 RhoC 可以调控QBC939 细胞的cyclinD1 和Cathepsin B 的mRNA 表达量。
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