尿激酶型纤溶酶原激活物抑制剂—氨氯吡咪对大鼠COPD模型病理改变的影响

论文摘要

目的：观察尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）抑制剂氨氯吡咪对大鼠COPD模型病理及病理生理改变的影响，探讨uPA系统成分在COPD发病中的作用。方法：健康2级雄性Wistar大鼠24只随机分为3组，1组为正常对照组，另外2组用气管内注入脂多糖加烟熏法制作大鼠COPD模型，其中1组为模型组，另1组给予口服氨氯吡咪，为氨氯吡咪组。7周后检测各组大鼠的（1）肺功能；（2）支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数及分类；（3）肺组织切片天狼猩红染色观察支气管肺组织的胶原沉积；（4）肺组织切片免疫组化染色观察uPA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的蛋白定位和表达；（5）实时荧光定量PCR检测各组大鼠肺组织uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表达。结果：（1）肺功能：模型组呼气阻力（Re）显著高于对照组[（4.17±0.72）mmHg．s-1．g-1 vs（1.95±0.56） mm Hg．s-1．g-1，P＜0.01]和氨氯吡咪组[（4.17±0.72） mm Hg．s-1．g-1vs（1.61±0.25），P＜0.01]，0.3s用力呼气容积／用力肺活量(FEV0.3／FVC％)、呼气峰流速（PEF）均显著低于对照组[分别为（51.80±3.86）％vs（95.34±2.80）％、（15.37±1.76）ml／s vs（31.57±5.17）ml／s，P均＜0.01]和氨氯吡咪组[分别为（51.80±3.86）％vs（98.46±0.94）％、（15.37±1.76）ml／s vs （41.65±3.21） ml／s，P均＜0.01]；（2） BALF炎性细胞：模型组BALF中白细胞总数及中性粒细胞、单核-巨噬细胞百分比[分别为（6.64±1.43）×106／ml、（3.43±1.04）％、（5.35±2.53）％]显著高于对照组[分别为（2.14±0.68）×106／ml、（1.13±1.59）％、（1.27±1.18）％]和氨氯吡咪组[分别为（4.17±1.18）×106／ml、（1.05±0.20）％、（2.52±1.60）％]（P均＜0.001）；对照组和氨氯吡咪组炎性细胞间比较无明显差异；（3）胶原定量分析：模型组Ⅰ型胶原为主的细胞外基质（ECM）在气道壁过度沉积，胶原面积显著高于对照组[（67050±14710）VS（11797±2806），P＜0.001]和氨氯吡咪组[（67050±14710）VS（17113±5945），P＜0.001]；而对照组和氨氯吡咪组间胶原定量分析无显著差异；（4） uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白表达：主要表达在肺内的炎性细胞（巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞）、气道上皮细胞、肺泡上皮细胞和成纤维细胞。模型组大鼠支气管肺组织uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白表达[分别为（0.166±0.010）、（0.158±0.024）、（0.171±0.012）、（0.159±0.007）]显著高于对照组[分别为（0.137±0.015）、（0.122±0.009）、（0.144±0.005）、（0.128±0.133）]和氨氯吡咪组[分别为[（0.126±0.004）、（0.120±0.010）、（0.122±0.004）、（0.131±0.006）]（P均＜0.001），且uPAR蛋白表达与中性粒细胞百分比成正相关（r=0.754，P=0.031）。氨氯吡咪组uPA、PAI-1蛋白表达显著低于对照组（P＜0.05）。（5） uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表达：模型组大鼠肺组织uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9 mRNA的表达[分别为（4.37±1.85）×10-5、（4.40±1.55）×10-5、（6.61±4.07）×10-5、（5.91±2.52）×10-5]显著高于对照组[分别为（1.30±1.08）×10-5、（2.39±2.05）×10-5、（1.89±0.74）×10-5、（1.85±0.72）×10-5]（P＜0.05）。氨氯吡咪组大鼠肺组织uPA、MMP-9 mRNA的表达下降，显著低于模型组（P＜0.05）；uPAR、PAI-1 mRNA水平也有所降低，但与模型组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论：①气管内滴注脂多糖加烟熏法所致COPD大鼠模型支气管肺组织内uPA、uPAR、PAI-1及MMP-9的蛋白和基因表达均显著高于正常对照组；②应用uPA抑制剂氨氯吡咪可下调uPA系统成分及MMP-9的表达，显著减轻COPD大鼠气道炎症和病理结构改变。提示uPA系统成分可能是COPD病理过程中炎症反应和组织重塑中具有关联作用的重要物质。

论文目录

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• 结论
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