GnRHa对子宫内膜异位症内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响

论文摘要

目的研究亮丙瑞林(LA)对子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞生长增殖及血管形成的影响。方法体外原代培养人子宫内膜异位症异位及在位子宫内膜间质细胞,应用免疫细胞化学法进行细胞鉴定;用不同浓度的LA(0、0.01、0.1、1、10ug/ml)处理体外培养的人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞0～96小时,倒置显微镜下观察细胞的生长状况及细胞的形态变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其对内膜间质细胞生长增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测不同浓度的LA对异位及在位内膜间质细胞凋亡及细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测不同浓度的LA对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果体外培养异位内膜间质细胞14例,成功12例,成功率为85.7%;在位内膜培养16例,均成功:异位及在位内膜细胞传代培养成功;免疫细胞化学鉴定分离培养的异位及在位内膜细胞,波形蛋白染色阳性率均在95%以上。倒置显微镜下观察,异位及在位内膜细胞形态无明显差异,24小时贴壁后,细胞呈纺锤形,随时间的推移,细胞逐渐变细长,排列呈编织状,边界不清,细胞间无明显的接触抑制,细胞培养10代以内形态基本不变;不同浓度的LA作用后,异位及在位内膜间质细胞的生长增殖能力均降低,呈现浓度和时间依赖性,细胞形态发生明显变化,0.01ug/ml浓度的LA作用48小时后,细胞形态变化不明显,可见个别漂浮细胞,10ug/ml浓度的LA作用48小时后,贴壁细胞数明显减少,细胞生长欠佳,形态变化明显,细胞出现核固缩,核浆比例减小,细胞透光性减低,培养液内漂浮细胞明显增多,随处理时间的延长,上述变化更为明显。MTT测定结果显示LA可抑制异位及在位内膜间质细胞的生长增殖且呈时间剂量依赖性,0.1ug/ml的LA作用后异位内膜间质细胞在24h、48h、72h、96h的细胞抑制率分别为33.74%、52.23%、62.04%、68.72%,在位内膜间质细胞的细胞抑制率分别为13.13%、30.29%、44.26%、58.14%,1ug/ml的LA作用后异位内膜间质细胞的细胞抑制率分别为51.61%、60.64%、70.00%、74.31%,在位内膜细胞的抑制率分别为24.97%、36.70%、52.68%、67.35%,LA对异位内膜细胞的抑制作用在每一时间点均强于在位内膜细胞(P＜0.05),此抑制作用呈时间剂量依赖性;Annexin V—FITC和PI双染结果显示,LA对异位及在位内膜间质细胞均有明显促凋亡作用,作用48h后,两种细胞凋亡率明显增高,凋亡率随浓度的增加而增高,差异有统计学意义(P＜0.05),LA对异位内膜细胞的凋亡作用强于在位内膜细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期检测见LA作用后,S期细胞数均减少,从G1期到S期发生抑制,此抑制作用随浓度的增加而增强(P＜0.05),异位内膜间质细胞G1期细胞百分数由19.45±3.47逐渐增加到34.92±4.14(0.1ug/ml)和51.47±5.07(1ug/ml),差异有统计学意义(P＜0.01),在位内膜间质细胞G1期细胞百分数由58.50±8.96增加到74.80±6.96(0.1ug/ml)和84.35±5.92(1ug/ml),差异有统计学意义(P＜0.05)。免疫细胞化学结果显示:LA可明显降低子宫内膜异位症异位及在位内膜细胞VEGF的表达(P＜0.01),作用48小时后,异位内膜间质细胞VEGF表达的阳性率积分由120.80±19.46下降至70.60±5.32(0.1ug/ml)和50.80±9.09(1ug/ml),在位内膜间质细胞VEGF表达的阳性率积分由83.00±9.35下降至54.40±5.32(0.1ug/ml)和40.60±4.88(1ug/ml),对异位细胞VEGF表达的影响明显强于在位内膜间质细胞(P＜0.05)。结论1、LA可明显抑制人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞的生长并促进其凋亡,呈时间剂量依赖性。2、LA可降低异位及在位内膜间质细胞VEGF的表达。3、以上作用在异位内膜间质细胞强于在位内膜间质细胞。

论文目录

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• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
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