RNA干扰抑制MCF-7细胞端粒酶对其基质金属蛋白酶-2分泌的影响

论文摘要

利用本实验室已构建好的干扰人端粒酶hTERT的shRNA体内表达载体（PGCsi-hTERT）,观察沉默乳腺癌MCF-7细胞中hTERT基因对细胞基质金属蛋白酶-2的影响,为以端粒酶为靶点的肿瘤治疗学研究提供理依据。将PGCsi-hTERT表达载体通过LipofectamineTM 2000脂质体转染试转染MCF-7细胞, G418选择性筛选培养,得到稳定抗药的细胞克隆。该稳定细胞克隆再经hTERT RT-PCR半定量检测mRNA和TRAP-ELISA检测端粒酶活性,证明该稳定抗药的细胞克隆具有明显的hTERT沉默效果,表明已成功获得沉默hTERT稳定转染的MCF-7阳性克隆。进一步通过RT-PCR半定量检测和明胶酶谱分析观察沉默hTERT后对细胞MMP-2的影响,结果显示稳定抑制端粒酶活性的MCF-7细胞克隆,MMP-2 mRNA的相对表达量没有变化;同时明胶酶谱检测酶原型MMP-2的分泌明显减少,提示端粒酶可能在参与调节MMP-2翻译过程中起作用,其确切作用机制好有待于进一步明确和探讨。

论文目录

• 提要
• 引言
• 材料与方法
• 一、实验材料与试剂
• 1.1 细胞株
• 1.2 主要实验试剂
• 2、主要仪器
• 二、实验方法
• 1、 pGCsi- hTERT质粒DNA的扩增和提取
• 2、乳腺癌细胞系MCF-7细胞培养、传代、冻存和复苏
• 3、MCF-7细胞的转染及阳性克隆筛选
• 4、转染阳性克隆干扰效果的检测
• 5、 hTERT干扰后细胞的MMP观察
• 结果
• 1. pGCsi-hTERT 质粒DNA的扩增和提取
• 2. MCF-7细胞的转染及阳性克隆筛选
• 3. 转染阳性克隆干扰效果的检测
• 4. hTERT 干扰后细胞的MMP 观察
• 讨论
• 1. hTERT 基因的表达及其与端粒酶活性的相关性
• 2. RNA干扰hTERT m RNA表达和端粒酶活性的抑制效应
• 3. 抑制端粒酶同时伴随基质金属蛋白酶-2分泌下降
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢