论文摘要
[背景与目的]恶性肿瘤的两个最基本特征是失控性细胞增殖和转移。近年来,大量研究揭示恶性肿瘤细胞的上述生物学行为受多种因素的调控,其中生长因子及其受体起关键作用。20世纪90年代以来,以生长因子受体为治疗靶标的分子靶向治疗引起世界各国的普遍关注。目前依据肿瘤患者的受体、基因研制的单克隆抗体配合放化疗已成为肿瘤综合治疗中最重要的方法之一。单克隆抗体抗肿瘤的机理包括：阻断信号传导途径、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）或补体依赖的细胞毒作用（complement dependent cellular cytotoxicity, CDCC）,以及免疫调节作用。表皮生长因子受体（pidermal growth factor receptor, EGFR）广泛分布于人体各组织的细胞膜上,EGFR高表达的肿瘤恶性程度高,易发生转移,缓解期短,复发率高,生存期短。西妥昔单抗（cetuximab, C225）作为一种抗EGFR靶向治疗药物,与放、化疗联合或单药应用已在多种恶性肿瘤治疗中取得了很好的效果。C225作为特异性抗体,其作用机理为阻断细胞内信号传导途径,从而抑制癌细胞的增殖,诱导癌细胞的凋亡。目前有报道单克隆抗体能诱导免疫恢复,干扰特定抗原与它的配体结合,可以诱导自身免疫应答。化疗对细胞免疫反应有一定程度的抑制作用。但是目前尚无C225与化疗联合应用时,对患者肿瘤局部组织免疫状态影响的报道。本研究通过检测患者应用C225联合化疗前后肿瘤组织中CD8、IL-2、TNF-α、VEGF、TGF-β1等表达情况,进而分析C225联合化疗对肿瘤微环境免疫状态的影响及此影响是否有可能与临床疗效相关。此方面的研究将会为临床上更好的选择用药提供理论依据。[方法]收集应用C225联合化疗的12例肿瘤患者,取得治疗前后的肿瘤组织标本,对治疗前后的肿瘤组织应用免疫组化的方法进行检测并比较前后表达强度的变化,检测指标为CD8 （cluster of differentiation8）、白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、转化生长因子-β1 （transforming growth factor-β1, TGF-β1）。评价12例患者的临床疗效,采用配对样本的符号秩和检验（Wilcoxon配对法）比较各免疫指标治疗前后表达强度是否有差异,相关关系应用Spearman相关分析,采用x2检验估计法统计各指标表达强度变化情况与治疗结果的关系。[结果]1、TGF-β1的表达强度治疗前后比较没有统计学差异,P值>0.05,治疗前后TGF-β1的表达强度变化与疗效的关系有统计学差异,P值=0.05。TGF-β1表达强度降低、无变化时,治疗临床获益率100%,TGF-β1表达强度升高时,治疗临床获益率为33.33%。2、CD8的表达强度治疗前后比较没有统计学差异,与疗效的关系也没有统计学差异,P值均>0.05。治疗前后比较,12例患者中有7例（58%）CD8表达强度降低。3、IL-2的表达强度治疗前后比较没有统计学差异,与疗效的关系也没有统计学差异,P值均>0.05。治疗前后比较,12例患者中有7例（58%）IL-2表达强度降低。3例治疗前IL-2表达为强阳性（+++）的患者疗效为1例SD,2例PR。4、TNF-α的表达强度治疗前后比较没有统计学差异,与疗效的关系也没有统计学差异,P值均>0.05。4例疗效为PD的患者中,治疗前肿瘤组织中TNF-α的表达仅1例为弱阳性（+）,其余3例均为阴性（-）。2例治疗前TNF-α表达为强阳性（+++）的患者疗效均为PR。5、VEGF的表达强度治疗前后比较没有统计学差异,与疗效的关系也没有统计学差异,P值均>0.05。治疗前后比较,12例患者中有5例（41.7%）VEGF表达强度升高。6、治疗前后IL-2表达强度变化与治疗次数呈显著性负相关,Spearman相关系数为-0.585,P=0.046。TGF-β1表达强度变化与疗效呈显著性负相关,Spearman相关系数为-0.684,P=0.014。CD8、TNF-α和VEGF的表达强度变化之间及与疗效、治疗次数相关性均无统计学差异,P值均>0.05。治疗前TNF-α与IL-2的表达强度有显著性正相关,Spearman目关系数为0.629,P=0.028。治疗后TGF-β1与CD8的表达强度有显著性负相关,Spearman相关系数为-0.664,P=0.019。[结论]1、治疗前后TGF-β1的表达强度没有统计学差异,TGF-β1的表达强度变化与疗效呈负相关,TGF-β1表达强度降低、无变化时,近期疗效好,TGF-β1表达强度升高时,近期疗效差。提示C225联合化疗后有的患者细胞免疫反应降低,有的细胞免疫反应增强。2、治疗前后比较,CD8、IL-2、VEGF、TNF-α的表达强度均没有统计学差异,表达强度变化与疗效也均没有相关性,CD8、IL-2、VEGF、TNF-α和TGF-β1的表达强度变化之间无相关性。3、治疗前后IL-2表达强度与治疗次数呈负相关,即C225联合化疗的次数越多,IL-2表达强度越低,提示可能随治疗次数增多,免疫抑制加重。4、治疗前TNF-α与IL-2表达强度呈正相关,可能提示TNF-α与IL-2的表达有相互促进或者其中一项促进另一项表达,具有协同抗肿瘤作用。治疗后TGF-β1与CD8表达强度呈负相关,提示TGF-β1可能通过抑制T细胞的增殖抑制特异性细胞免疫应答。5、治疗前IL-2、TNF-α强表达有治疗效果好的趋势,TNF-α表达阴性或表达强度较弱有治疗效果差的趋势,提示初始免疫状态可能可以预测近期疗效。