禽反转录病毒混合感染肉种鸡抗原定位及诊断的研究

论文摘要

当前,我国鸡群中由于反转录病毒诱发的免疫抑制性疾病已日益常见,由其造成的经济损失也日趋严重,鉴于混合感染造成的损失给养殖业带来巨大的危害。因此本研究从我国禽病防治的实际出发,诣在通过人工接种ALV-J与REV ,建立这两种病毒的肉种鸡混合感染的病理模型。通过血液学、免疫学、病理学等方法研究了混合感染后血液指标的变化;抗原在体内各组织及细胞内的分布,肿瘤的形成和抗原量之间的关系,以及各器官组织的病理变化,为认识、研究、诊断和控制免疫抑制性疾病的混合感染提供理论基础,并且为检测这两种病毒的混合感染的早期感染提供强有力手段。血液学试验:定期检测了血液白细胞与淋巴细胞的数量及血清指标的浓度。结果表明:实验期间,混合感染组白细胞和淋巴细胞数目低于单独感染组,表现为1-4周先降低,4-7周又回升。1周时,感染组血清指标与对照血清指标出现极显著性差异,而体重在第5周龄时才出现显著性差异。表明双重病毒感染对骨髓干细胞转化为成熟白细胞的功能及胸腺培育成熟T淋巴细胞功能的影响比单独病毒感染严重。血清指标检测结果说明其可以作为鸡生长抑制的早期诊断指标之一;产生肿瘤的鸡的血清指标低于同时期未形成肿瘤鸡的血清指标,因此,这些指标可作为检测肿瘤存在的依据之一。病理学试验:检测了免疫器官及部分内脏器官的动态病理学变化。结果显示:混合感染组肝脏肿大、易碎、呈土黄色;腺胃肿大,粘膜脱落,乳头淤血严重,单独感染病变较轻,混和感染组的胸腺和法氏囊比单独感染组萎缩明显。混合感染组的免疫器官及内脏器官的组织学病变明显严重于单独感染组。混合感染组主要以淋巴细胞和网状细胞增生为主,偶见髓样瘤细胞存在。ALV-J感染主要引起骨髓髓系细胞灶状或弥漫性增生。REV相似于混合感染组;免疫组织化学技术:检测了混合感染组ALV-J和REV在各器官及细胞内的分布,免疫器官内淋巴细胞的凋亡情况。结果表明:混合感染组的免疫器官,肝脏、心肌、腺胃、肾脏、睾丸等器官能检测到REV和ALV-J抗原的的存在,但在同一组织内能同时检测到两种病毒抗原的几率很小。混合感染的病毒分布与单独感染没有器官和组织的差异;混合感染组病毒诱导胸腺、脾脏、法氏囊内淋巴细胞凋亡数目比ALV-J多,同REV比较不明显,这种现象在3–7周龄尤为明显。由实验结果可知淋巴细胞凋亡是免疫器官萎缩和机体免疫抑制的重要原因。组织病理学观察,连续切片的免疫组织化学的检测和PCR检测结果的一致,说明这几种方法都适合反转录病毒的检测,组织病理学观察肿瘤的发生发展的形态为普通病例的诊断提供简单易行的方法。对于反转录的感染,PCR检测两种病毒的共感染优于免疫方法。本研究表明:混合感染的组织病理变化以REV的感染症状为主,可知ALV-J对REV的病变起协同作用;混合感染的病毒分布与单独感染没有器官和组织的差异;混合感染组的免疫器官及内脏器官的组织学病变明显严重于单独感染组;产生肿瘤的鸡的血清指标低于同时期未形成肿瘤鸡的血清指标,因此,这些低血清指标可作为检测肿瘤存在的依据之一。

论文目录

• 英文缩略
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 网状内皮组织增殖病与J 亚群禽白血病概况
• 1.2 REV 与ALV-J 病原特性及致病机理
• 1.2.1 REV 与ALV-J 病原特性
• 1.2.2 REV 与ALV-J 的致病机理
• 1.3 流行病学
• 1.3.1 宿主范围
• 1.3.2 传播方式
• 1.4 RE 与J 亚群白血病的临床症状与病理组织学变化
• 1.4.1 RE 临床症状与J 亚群白血病的临床症状
• 1.4.2 组织学变化
• 1.5 禽反转录病毒的免疫抑制及其机理
• 1.5.1 禽类的免疫抑制
• 1.5.2 免疫抑制的主要机理
• 1.6 网状内皮增生症与J 亚群白血病的诊断与检测
• 1.6.1 传统方法包括以下几方面
• 1.6.2 分子方法
• 1.7 混合感染的近况
• 1.8 本研究的目的意义
• 2. 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 试验地点
• 2.2 方法及检测指标
• 2.2.1 病毒及其TCID50 测定
• 2.2.2 试验动物感染及饲养
• 2.2.3 REV 与ALV-J 对鸡血液学指标的影响
• 2.2.4 增重、免疫指标及死亡率的测定
• 2.2.5 动态病理学变化
• 2.2.6 免疫酶及免疫荧光间接法检测REV 与ALV-J 在器官内的分布
• 2.2.7 冰冻切片的免疫免疫酶及免疫荧光间接检测法
• 2.2.8 免疫器官细胞凋亡的检测
• 2.2.9 PCR 检测
• 3 结果与分析
• 3.1 病毒混合感染与单独感染雏鸡后的临床症状
• 3.2 感染后对鸡血液学指标的影响
• 3.2.1 白细胞数量变化计数
• 3.2.2 血液中T 淋巴细胞数量变化
• 3.2.3 鸡血清内TP、HDL-c、LDL-c、TG、CHO 的含量变化
• 3.3 增重、免疫指标及死亡率
• 3.3.1 病毒感染后对鸡体重的影响
• 3.3.2 病毒感染后对鸡免疫指标的影响
• 3.3.3 感染后鸡死亡情况
• 3.4 动态病理学观察结果
• 3.4.1 剖检病变
• 3.4.2 组织学病变
• 3.5 免疫组化法检测抗原在器官内的分布
• 3.5.1 免疫酶组化检测
• 3.5.2 免疫荧光的检测
• 3.6 TUNEL 法检测免疫器官的细胞凋亡
• 3.6.1 法氏囊
• 3.6.2 胸腺
• 3.6.3 脾脏
• 3.7 PCR 结果
• 3.8 电镜
• 4 讨论
• 4.1 抗原在免疫器官及其它内脏器官的分布
• 4.2 病理学观察
• 4.3 细胞凋亡及血清指标对肿瘤产生的监测作用
• 4.4 冰冻切片的免疫技术和PCR 及电镜在诊断中的应用
• 5 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文