大鼠门脉系统不同血供对肝再生的影响 ——辅助肝移植门静脉血供方式的探讨

论文摘要

背景及目的辅助肝移植是一种治疗急性肝功能衰竭拥有良好前景的手段，其具有保留原肝再生机会、可能避免免疫抑制剂的长期应用等优点。然而，辅助肝如何重建门静咏系统的血流一直存在争议，通常应用的是供体门静咏与受体门静咏主干的端侧吻合。然而，其存在门静咏血流竞争、吻合口血栓发生机率高等问题。为了不干扰宿主肝脏的门静咏血供，近年有学者提出辅助肝脏门静咏动咏化或者左肾静咏化，并有零星的个案报道。究竟辅助肝移植门静咏的血供采用何种方式更为合理，值得深入研究。本研究观察SD大鼠90％肝切除诱导急性肝功能衰竭时，不同门静咏血内毒素水平的变化，了解肠源性内毒素的入血途径；探讨同一大鼠体内门静咏分支接受不同血流（门静咏血、动咏血）对肝脏再生的影响，明确肠腔分流及门静咏动咏化辅助肝在肝切除急肝衰中的意义；论证肠系膜静咏供血的辅助肝移植治疗急性肝功能衰竭的可行性。方法1．建立90％肝切除诱导急性肝功能衰竭大鼠模型，并以70％肝切除和假手术为对照，观察术后大鼠生存情况，不同时间点（6h、12h、18h、24h）肝功能、血氦及TNF一Ⅱ变化；不同部位血液（肠系膜静咏血、脾静咏血和外周血）内毒素水平；肝脏及肠道组织病理改变。2．建立半肝门静咏动咏化大鼠模型，并设立全肝门静咏动咏化及假手术作为对照，对比观察术后不同时间点（3d、7d、2w）肝功能、血氦，不同肝叶重量，肝脏病理，投射电镜，以及肝细胞Kj67和Caspase一3免疫组化染色结果。3．建立模拟95％肝切除+半肝门静咏动咏化+肠腔分涡g（95％PH+HPvA+MCS）的大鼠模型，并以95％肝切除（95％PH）、95％肝切除+肠腔分流（95％PH+MCS）以及模拟95％肝切除+半肝门静咏动咏化（95％PH+HPvlA）大鼠作为对照。观察术后大鼠生存情况，不同时间点肝功能、血氦、内毒素水平，不同肝叶重量，肝脏病理，以及肝细胞Ki67免疫组化染色结果。4．建立肠系膜静咏供血的辅助肝移植（ALT—Mvas）大鼠模型，并以90％肝切除大鼠作为对照，观察术后大鼠生存情况；宿主肝脏和辅助肝脏的重量变化及病理转归。5．统计学处理：应用sPSSl6．0软件进行单因素方差分忻、秩和检验、生存分忻等，P<0．05判定为有统计学意义。结果1．90％肝切除组大鼠在术后28—51小时内死亡，术后生存情况显著差于假手术组和70％肝切除组u=12．746，P=0．002)。90％肝切除组术后随时间推移，血清ALT、．AST、ALP、血氦均逐渐升高，而白蛋白逐渐下降。70％肝切除组术后24h和90％肝切除组术后6h、12h，肠系膜静咏血内毒素水平显著高于脾静咏血和外周静咏血。90％肝切除组术后随时间的推移，血清TNF一Ⅱ逐步升高；肠系膜静咏、脾静咏血和外周血内毒素水平与外周血TNF一Ⅱ水平均具有显著的相关性（P<0．0¨01），其中肠系膜静咏血的相关系数最高，达到0．933。90％肝切除组，术后可见肝组织损害，肝小叶结构模糊，血窦呈弥漫性或局灶性扩张，肝细胞变性、坏死，门咏区有炎性细胞浸润。大鼠回肠粘膜固有层变薄，部分上皮细胞变性脱落，绒毛水肿增粗，排列紊乱，高度缩短，淋巴细胞增多。2．半肝门静咏动咏化组、全肝门静咏动咏化组及假手术组大鼠均获得良好存活。术后7d和2w时，全肝门静咏动咏化组血氦显著高于另两组。全肝门静咏动咏化术后，大鼠各叶肝脏重量／鼠重与假手术组对比，均无明显变化。半肝门静咏动咏化术后，全肝重量／鼠重（TLw／Rw）术后各时间点（3天、7天、2周）与假手术组均无显著差异；右肝重／鼠重（RLw／Rw）随时间推移逐渐升高，而左+中肝重／鼠重『（1JM）Lw／Rw]逐渐下降（P值均<0．05）。术后3d和7d时，半肝门静咏动咏化组右半肝的肝细胞Ki67阳性率显著高于其他各组（P<0．05），而半肝门静咏动咏化的左半肝术后均低于其他各组。术后各时间点（3d、7d、2w），半肝门静咏动咏化组左肝肝细胞C；aspase-一3阳性率显著高于其他各组，P<0．05；其中以术后7天时达到最高。透射电镜显示，半肝门静咏动咏化术后左肝可见较多肝细胞凋亡，随时间推移，逐渐加重。3．模拟95％PH+HPvA+MCS组生存时间显著长于模拟95％PH+HPvA组，而模拟95％PH+HPvlA组又显著长于95％PH组和95％PH+MCS组（u=17．347，P=0．001。）。术后48h和72h时，与模拟95％PH+HPvA组相比，模拟95％PH+HPvA+MCS组的ALT、AST、ALP、TB和血NH均显著降低，ALB显著升高。模拟95％PH+HPvA组，术后随时间的推移，ALT、AST、ALP、TB和血NH逐渐升高，而ALB逐渐下降。模拟95％PH+HPvlA+MCS组，术后随时间推移，ALT、AsT、ALP、TB和血NH逐渐下降，而ALB逐渐升高。门静咏血和外周血内毒素水平对比，仅在模拟95％PH+HPvA组术后24时，门静咏内毒素水平显著高于外周血水平，而其他各组对比无显著差异。术后2411，95％PH组和95％PH+MCS组的门静咏和外周血内毒素水平均显著高于模拟95％PH+HPvlA组和模拟95％PH+HPvA+MCS组，而模拟95％PH+HPvlA组又显著高于模拟95％PH+HPvA+MCS组。模拟95％PH+HPvA组术后随时间推移，门静咏和外周血内毒素水平逐渐升高，而模拟95％PH+HPvA+MCS组术后内毒素水平基本稳定。模拟95％PH+HPvA+MCS组三角叶／鼠重的比值随时问推移逐渐升高。术后48h和72h时，模拟95％PH+HPvA+MCS组三角叶／鼠重的比值均显著高于模拟95％PH+HPvA组。模拟95％PH+HPvA+MCS组术后前3天（24h、48h、72h）（左+中叶）／鼠重的比值亦无显著差异，而术后7d时显著降低。术后各时间点（2411、48h、72h），模拟95％PH+HPvlA+MCS组三角叶肝脏肝细胞Ki67阳性率显著高于模拟95％PH+HPvA组。术后24h，模拟95％PH+HPvA+MCS组左叶+中叶肝脏肝细胞Kj67阳性率显著高于模拟95％PH+HPvlA组。4．90％肝切除组10只SD大鼠术后25—46小时内全部死亡（0／10）；90％肝切除组+肠系膜上静咏异位辅助肝移植（90％PH+AITMvBS）2周组10只大鼠存活率8／10。90％PH+Au=MvBS生存情况显著好于90％肝切除组（u=15．752，P<0．001）。90％PH+Au=MvBS术后3天，ALT、AsT、ALP均显著高于假手术组、7天组和2周组（P<0．05），而ALB显著低于其他各组（P<0．05）。TB、血氦各组问无显著差异。90％PH+Au=MvBS组术后宿主肝脏／鼠重的比值逐渐升高，而辅助肝脏／鼠重的比值逐渐下降。结论1．90％肝切除能够成功诱导急性肝功能衰竭。进行性加重的内毒素血症是导致其肝功能衰竭的重要环节。通过肠系膜静咏回流是肠源性内毒素进入血液循环的主要途径之一。2．在同一大鼠体内，门静咏动咏化的肝脏由于无法获得门静咏系统血供，术后门静咏动咏化的肝脏逐渐萎缩，而获得门静咏血供的肝脏逐渐增生。实验结果支持门静咏系统存在肝营养因子的学说。3．在肝切除诱导急性肝功能衰竭的治疗中，需要门静咏动咏化辅助肝脏联合肠腔分流才能获得良好的存活率。4．肠系膜静咏供血异位辅助肝移植模型操作可行，手术成功率高，并能成功逆转90％肝切除诱导的急肝衰。宿主肝脏能够获得良好的再生，而辅助肝脏在术后2周时仍保持良好的肝脏结构和形态。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分肠源性内毒素在肝切除诱导急肝衰中的意义
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分门静脉动脉化辅助肝脏及肠腔分流在肝切除 急肝衰中的意义
• 实验一大鼠自体半肝门静脉动脉化模型的建立 —不同门静脉血供对肝脏再生的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 实验二门静脉动脉化辅助肝及肠腔分流在 肝切除急肝衰中的意义
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 肠系膜静脉供血的异位辅助肝移植治疗肝衰竭的实验研究.……86
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 博士期间发表论文