论文摘要
目的研究结直肠肿瘤患者外周血单个核细胞HLA（human leukocyteantigen,HLA）-A和HLA-B mRNA的表达情况,初步探讨外周血单个核细胞在宿主细胞免疫中的作用,以及HLA-A和HLA-B在监测肿瘤发生、发展中的临床意义。方法为了避开HLA-Ⅰ的多态性,我们针对其外显子中的保守区,用PrimerPremier 5.0软件设计HLA-A和HLA-B特异性引物,比对没有其他序列同源。以Beta-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR方法检测结直肠肿瘤患者（结直肠肿瘤组,n=50）、结直肠良性病变患者（良性病变组,n=35）和健康体检者（正常对照组,n=42）外周血单个核细胞HLA-AmRNA和HLA-B mRNA的表达,并比较结直肠肿瘤不同TNM分期中HLA-A mRNA和HLA-B mRNA的表达。结直肠肿瘤组和良性病变组所有患者均经病理确诊。三组平均年龄相近。用Rest（relativeexpression software tool）软件计算相对表达率（Ratio）。化学发光方法检测三组对象中血清癌胚抗原（CEA）、癌相关抗原（CA）19-9和CA242水平。用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析HLA-A mRNA、HLA-B mRNA在结直肠肿瘤检测中的初步应用。结果1.外周血单个核细胞HLA-A和HLA-B mRNA的相对表达率正常对照组PBMC的HLA-A和HLA-B mRNA相对表达率分别为0.99±0.47,1.13±0.6;结直肠良性病变组相对表达率分别为0.76±0.59,0.84±0.57;结直肠肿瘤组分别为0.38±0.31和0.39±0.35。结直肠肿瘤组HLA-A和HLA-B mRNA相对表达率低于正常对照组和结直肠良性病变组（P＜0.001）。2.结直肠肿瘤不同TNM分期HLA-A和HLA-B mRNA的表达结直肠肿瘤组外周血单个核细胞HLA-A mRNA在TNMⅠ～Ⅳ期相对表达率分别为0.48±0.32,0.64±0.75,0.56±0.41,0.61±0.34。HLA-B mRNA在TNMⅠ～Ⅳ期相对表达率分别为1.28±0.29,0.47±0.35,0.58±0.40,0.46±0.25。结直肠肿瘤组外周血单个核细胞HLA-A mRNA在TNM不同分期之间的表达无统计学差异（P＞0.05）。结直肠肿瘤组外周血单个核细胞HLA-B mRNA在TNMⅠ期患者中的表达高于Ⅱ期和Ⅳ期（P＜0.05）,在其他不同分期之间差异无统计学意义（P＞0.05）。3.PBMC的HLA-A和HLA-B mRNA在结直肠肿瘤检测中的初步应用外周血单个核细胞表达的HLA-A和HLA-B mRNA监测结直肠肿瘤的敏感性分别为84.4%和70.2%。结论1.本实验是首次研究结直肠肿瘤患者外周血单个核细胞HLA-A mRNA和HLA-B mRNA的表达水平,实验发现结直肠肿瘤患者外周血单个核细胞HLA-AmRNA和HLA-B mRNA的表达水平低于结直肠良性病变组和正常对照组。2.结直肠肿瘤患者外周血单个核细胞HLA-A mRNA和HLA-B mRNA有望发展成为一个新的结直肠肿瘤诊断指标,为肿瘤诊断提供了新视野。
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