败酱草总黄酮抗小鼠宫颈癌作用的研究

论文摘要

宫颈癌是一种常见的生殖系统恶性肿瘤,中药治疗以其安全、有效、毒副作用小、药源广等优点已成为国内外研究的热点。败酱草在我国分布广泛,中医常用于配伍治疗多种炎症及妇科病,近年来发现它还具有显著的抗癌活性,其药理活性及抗癌机制值得进一步研究。本试验利用溶剂萃取法得到败酱草总黄酮,经AB-8型大孔吸附树脂纯化分离总黄酮。通过建立荷瘤小鼠（小鼠U14宫颈癌）模型和体外培养肿瘤细胞株（人宫颈癌Hela细胞株）,对败酱草总黄酮抗肿瘤作用的机制进行了初步研究,结果如下:1.用溶剂萃取法制备败酱草黄酮粗提物,经AB-8型大孔吸附树脂纯化得到败酱草总黄酮（PJF）冻干粉65.57g,冻干粉提取率为1.311%;经分光光度计测定计算败酱草中黄酮含量为0.478%;经显色试验分析败酱草总黄酮中黄酮成分主要有黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类化合物。2.体外用败酱草总黄酮（PJF）不同剂量处理人宫颈癌Hela细胞,发现PJF对Hela细胞有明显的生长抑制作用,表现出良好的剂量-效应关系。3.通过Hoechst33258荧光单染、AO/EB荧光双染、DNA片段化分析表明PJF可以诱导Hela细胞凋亡,对细胞中乳酸脱氢酶（LDH）的检测表明,在PJF作用72h前,细胞死亡的主要方式为凋亡。4.败酱草总黄酮（PJF）不同剂量作用小鼠U14宫颈癌模型,结果表明,PJF能明显抑制实体瘤小鼠肿瘤生长并延长腹水瘤小鼠的存活时间,低、高剂量组（2.5g/kg和10g/kg）抑瘤率和生命延长率分别为21.7%、49.1%和46.3%、61.8%,具有显著的抑制小鼠移植性宫颈癌生长的作用。5.PJF高剂量组（10g/kg）荷瘤小鼠肝、肾外观色泽质地均正常,无明显病理学变化。肝脏病理切片镜检肝小叶,肝细胞排列紧凑、整齐;肾脏病理切片镜检可见肾细胞排列紧密,结构清楚,肾小球、肾小管明显可见;表明PJF高剂量组对荷瘤小鼠肝、肾没有形成明显的毒性作用。本试验应用提取分离的败酱草总黄酮,通过体外Hela细胞和体内U14肿瘤模型试验研究了败酱草总黄酮抗宫颈癌的作用,并从蛋白表达水平探讨了其诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理,为开发败酱草作为天然抗宫颈癌药物提供理论基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 宫颈癌概述
• 1.2 中药抗肿瘤研究进展
• 1.2.1 促进肿瘤细胞凋亡
• 1.2.2 增强机体免疫功能
• 1.2.3 诱导肿瘤细胞分化，抑制肿瘤细胞增殖
• 1.2.4 减毒作用
• 1.2.5 抗氧化作用
• 1.3 药物诱导肿瘤细胞凋亡研究进展
• 1.3.1 细胞调亡
• 1.3.2 细胞凋亡在肿瘤治疗方面应用
• 1.4 检测细胞凋亡的方法
• 1.4.1 细胞形态观察
• 1.4.2 细胞核DNA 含量及降解分析
• 1.5 黄酮抗肿瘤作用机制的研究进展
• 1.6 败酱草研究进展
• 第二章 败酱草总黄酮的提取及其含量测定
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 败酱草黄酮粗提物的制备
• 2.2.2 大孔吸附树脂精制败酱草黄酮（PJF）
• 2.2.3 败酱草总黄酮提取及精制工艺
• 2.2.4 败酱草总黄酮含量测定
• 2.2.5 败酱草总黄酮显色定性试验
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 败酱草醇总黄酮提取率
• 2.3.2 败酱草总黄酮含量
• 2.3.3 败酱草总黄酮显色结果
• 2.4 小结与讨论
• 第三章 败酱草总黄酮诱导人宫颈癌HELA 细胞凋亡的研究
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.2.1 细胞复苏、传代和冻存
• 3.2.2 Hela 细胞最佳试验密度选择
• 3.2.3 败酱草总黄酮（PJF）对Hela 细胞的细胞毒作用
• 3.2.4 细胞形态学变化观察
• 3.2.5 DNA 片段化分析
• 3.2.6 乳酸脱氢酶（LDH）活力测定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 Hela 细胞最佳试验密度选择结果
• 3.3.2 败酱草总黄酮对Hela 细胞的细胞毒作用
• 3.3.3 细胞形态学变化
• 3.3.4 DNA 片段化
• 3.3.5 乳酸脱氢酶（LDH）活力
• 3.4 小结与讨论
• 第四章 败酱草总黄酮抗宫颈癌活性及对免疫功能影响
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.2.1 造模
• 4.2.2 确定小鼠治疗剂量
• 4.2.3 试验分组和治疗方案
• 4.2.4 抑瘤率和生命延长率的测定
• 4.2.5 肝、肾、肿瘤组织病理切片观察
• 4.2.6 免疫指标测定
• 4.2.7 数据处理
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 败酱草总黄酮对肿瘤抑制率的影响
• 4.3.2 败酱草总黄酮对生命延长率的影响
• 4.3.3 肝、肾、肿瘤病理切片观察结果
• 4.3.4 免疫指标测定结果
• 4.4 小结与讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介