羌活化学成分及其对核酸内切酶PA_N抑制活性的研究

论文摘要

中药羌活为伞形科植物羌活（Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang）的干燥根茎,广泛分布于我国甘肃、青海、云南和四川一带。中药羌活性温,味辛、苦,入肾、膀胱经,具有祛风除湿、解表散寒、利尿止痛之功效。现代医药学研究证明,羌活中含有挥发油类,香豆素类,有机酸类,酯类,氨基酸类、糖类、甾醇类等化学成分,并具有抗炎、镇痛、解热,抗肿瘤,抗病毒等药理作用。中医临床多用于感冒风寒、风湿麻痹、骨节酸疼、风水浮肿等症。本课题以流感病毒（A/goose/Guangdong/1/96 （H5N1））高保守性核酸内切酶PAN作为靶标蛋白,对300种天然植物的各个组分样品进行高通量体外酶活筛选（HTS）,然后对筛选结果较好的样品进行核酸电泳检测,最后发现中药羌活对PAN核酸内切酶活性具有抑制作用,是一种潜在的抗流感药物,所以对羌活（Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang）的干燥根茎进行系统分离,以提供更多的化学信息。通过对羌活干燥根茎的95%乙醇和50%乙醇提取物进行萃取,对其中的石油醚层、乙酸乙酯层和正丁醇层分别进行系统分离,共得到13个化合物。通过理化性质分析和波谱解析鉴定了其中13个化合物,分别为：Apterin （1）、异虎耳草素（2）、阿魏酸（3）、珊瑚菜内酯（4）、虎耳草素（5）、6-甲氧基当归素（6）、佛手柑内酯（7）、异佛手柑内酯（8）、富马酸（9）、异补骨脂素（10）、vaginidiol（11）、白芷属脑（12）和EdulisinⅥ（13）。其中化合物1、化合物9、化合物10、化合物11为首次从该植物中分离得到。最后,对分离鉴定的13种化合物进行抗PAN活性评价,通过高通量体外酶活测发现化合物3的抑制率为76.47%,淬灭率为13.43%。

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ABSTRACT

主要符号表

1 前言

1.1 中药羌活的概况

1.2 化学成分研究

1.2.1 挥发油类

1.2.2 香豆素类

1.2.3 有机酸及有机酯

1.2.4 其他成分

1.3 药理学研究

1.3.1 抗炎、镇痛、解热作用

1.3.2 抗心律失常作用

1.3.3 对脑循环的作用

1.3.4 抗血栓形成和抗凝血作用

1.3.5 抗心肌缺血作用

1.3.6 抗过敏作用

1.3.7 抗肿瘤作用

1.3.8 抗氧化作用

1.3.9 抗菌、抗病毒作用

1.4 流感病毒简介

1.5 抗流感药物的研究进展

1.5.1 化学合成药领域

1.5.2 生物药领域

1.5.3 天然产物药领域

1.6 本课题的立题依据和研究内容

1.6.1 立题依据

1.6.2 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 主要实验试剂

2.1.2 主要实验仪器

2.1.3 植物来源

2.1.4 靶标蛋白

2.2 实验方法

2.2.1 天然产物库（NPL）的扩建

2.2.2 体外酶活筛选实验

2.2.3 核酸电泳实验

2.2.4 羌活的提取和萃取

2.2.5 石油醚层的分离

2.2.6 乙酸乙酯层的分离

2.2.7 正丁醇层的分离

2.3 化合物对PAN核酸内切酶活性抑制作用的测定

2.3.1 化合物样品待测液的制备

2.3.2 活性的测定

3 结果与讨论

3.1 天然产物库的扩建成果

3.2 天然产物抗PAN活性评价

3.2.1 体外酶活筛选结果

3.2.2 核酸电泳检测结果

3.3 植物的选择

3.4 提取分离方法的选择与优化

3.4.1 提取方法的选择

3.4.2 萃取条件的选择

3.4.3 分离方法的选择与优化

3.5 香豆素类化合物的性质

3.5.1 物理性质

3.5.2 化学性质

3.5.3 核磁共振谱的特点

3.6 分离化合物的结构解析

3.6.1 化合物1的结构鉴定

3.6.2 化合物2的结构鉴定

3.6.3 化合物3的结构鉴定

3.6.4 化合物4的结构鉴定

3.6.5 化合物5的结构鉴定

3.6.6 化合物6的结构鉴定

3.6.7 化合物7的结构鉴定

3.6.8 化合物8的结构鉴定

3.6.9 化合物9的结构鉴定

3.6.10 化合物10的结构鉴定

3.6.11 化合物11的结构鉴定

3.6.12 化合物12的结构鉴定

3.6.13 化合物13的结构鉴定

3.7 化合物的理化性质和波普数据

3.8 化合物对PAN核酸内切酶抑制活性的结果分析

4 结论

5 展望

6 参考文献

7 附图（表）

8 论文发表情况

9 致谢

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