β-淀粉样蛋白25-35诱导分化PC12细胞氧化损伤及MCI-186保护机制的研究

论文摘要

随着我国人口老龄化,阿尔茨海默病（AD）患病率呈上升趋势。研究表明,氧化应激能引起生物大分子物质氧化损伤,并能导致细胞凋亡,在AD发生中起着重要作用。曾有报道,MCI-186在再灌注早期能显著改善缺血诱导的海马齿状回突触长时程增强,具有改善学习记忆能力。其主要原因是,MCI-186作为一种新型自由基清除剂,可以特异性清除羟自由基（·OH）,抑制氧化应激及其继发的细胞凋亡,发挥神经保护作用。因此,认为MCI-186在阻止或延缓AD发生、发展中会起着一定的积极作用。本研究利用Aβ25-35作为诱导剂,体外诱导PC12细胞,制成理想AD细胞模型。应用TUNEL、MTT、HE染色、电镜及流式细胞仪等技术,判定细胞凋亡,并计算出凋亡率、凋亡指数、增殖指数等指标;采用邻菲罗啉化学发光法观察·OH产生和清除,Fura-2/AM荧光法测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i);采用ELISA法测定羰基蛋白、晚期糖基化终末产物（AGEs）含量,巴比妥酸荧光法测定丙二醛（MDA）含量,慧星法判定DNA损伤程度;通过RT-PCR、Western blot法研究NF-κB P65、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达。结果表明Aβ25-35可以产生·OH,使[Ca2+]i升高;可以升高羰基蛋白、AGEs、MDA等羰基化合物含量,加重DNA损伤程度;可使NF-κBP65、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达升高,提示Aβ25-35可以导致PC12细胞氧化损伤,并诱导其凋亡。本研究首次将MCI-186引入到AD细胞模型中,并对其预保护机制进行探讨。明确了MCI-186能够通过清除·OH、抑制钙超载、减少毒性羰基化合物的生成,在AD中发挥其抗氧化作用;并阐明了MCI-186可以通过下调NF-κB P65、Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达,在AD中发挥其抗凋亡作用。此类研究国内外未见相似报道。

论文目录

• 英文缩略词表
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 1 阿尔茨海默病细胞模型研究进展
• 2 氧化应激与阿尔茨海默病
• 3 β样淀粉蛋白与阿尔茨海默病
• 4 毒性羰基化合物与阿尔茨海默病
• 5 核因子-κB与阿尔茨海默病
• 6 Caspase-3与阿尔茨海默病
• 7 MCI-186 研究进展
• 第二部分 实验研究
• 第一章 AD 细胞模型的建立及 MCI-186 抗 Aβ25-35 诱导分化 PC12 细胞凋亡的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二章 Aβ25-35 诱导分化 PC12 细胞氧化损伤及 MCI-186 抗氧化机制的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第三章 Aβ25-35诱导分化PC12 细胞 NF-κB、Caspase-3 mRNA 和蛋白的表达及 MCI-186 对其影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 本文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读博士期间发表的学术论文
• 中文摘要
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