论文摘要
青光眼是一组以特征性视神经萎缩和视野缺损为共同特征的疾病,病理性眼压升高是其主要危险因素之一,目前是全世界第二位的双眼致盲性眼病,视网膜视神经是青光眼损伤的主要靶器官。复杂的视网膜功能和结构是基因表达复杂性的分子基础,任何一个视网膜损伤事件的分子机制,往往牵涉到多个基因的表达改变。不妨设想,在青光眼的发生发展过程中,视网膜由于慢性高眼压的刺激,必然存在着相关基因的差异性表达,即基因表达谱发生改变,一部分基因开放,另外一部分基因关闭,或者出现开放基因表达水平的变化。这些基因的表达产物具有明显的生物学效应,导致生理平衡的失调和病理性改变。如果能全面的了解和掌握慢性高眼压下导致视网膜损害基因的表达变化,研究它们的功能和病理条件下的作用,将有助于宏观地从分子水平理解青光眼视网膜视神经损害的机制,为青光眼的治疗和预防提供有意义的依据。目的:本研究以本课题采用35,000点的高密度Oligo基因芯片对大鼠慢性高眼压导致视网膜损害的六个时间点（7、35、60、90、180 and 360d）的基因表达情况加以研究,全面地探讨慢性高眼压影响下视网膜基因表达改变的宏观情况。方法:本研究分为三个部分:第一部分:高眼压动物模型的建立和鉴定采用532-二极管激光光凝大鼠左侧眼作为慢性高眼压视网膜损伤的模型,以对侧眼作为对照。Tono-penXL眼压计监测7、35、60、90、180及360d麻醉状态下的眼压。激光术后每个时间点采用HE染色光镜下观察房角的病理改变,并进行尼氏染色、甲苯胺蓝染色,观察不同时间视网膜神经节细胞计数,比较视神经髓鞘密度的变化。使用TEC-350V视觉电生理仪进行60及180d的F-VEP检查;第二部分:高密度Oligo基因芯片筛选大鼠视网膜慢性高眼压损伤差异基因一、差异基因的筛选:采用北京博奥生物公司35,000点的大鼠Oligo基因芯片,实验设计采用II型设计,并进行荧光交换实验。实验组样品为每个时间点实验眼视网膜组织的6个样品,共同对照样品由六个时间点大鼠对照眼视网膜组织总RNA等量混合而成。芯片杂交后,应用GenePixpro4.0图象软件进行分析,每个基因得到2个Ratio表达比值。把两次杂交实验变化趋势相同的基因认为是表达差异基因,删除信号弱的基因,用Ratio值做基准,定义Ratio表达比值≥2或≤0.5为表达差异基因,Ratio值在2和0.5之间为无差异基因。
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