论文摘要
目 的 （1）通过体外细胞培养实验,观察 TIMP-3 是否对HUVEC 的增殖产生抑制作用、以及其抑制的特点。（2）通过（SD-Wistar 及 Wistar-Wistar）原位大鼠腹主动脉移植动物实验,动态观察MMPS、TIMPS在移植动脉中的表达规律,探讨其在移植动脉硬化中的作用。（3）并将其移植主动脉段转染 TIMP-3 质粒,建立稳定的原位大鼠腹主动脉移植动物模型,观察 TIMP-3 质粒表达对移植血管的作用,探讨外源性 TIMP-3 在抑制慢性排斥反应中的作用。通过以上三部分实验,试图阐明 TIMP-3 在大鼠腹主动脉移植后抑制慢性排斥反应发生机制中的确切作用。 方 法 （1）在第一部分细胞培养实验中,采用形态学观察、MTT 法、[3H]-TdR 掺入法流式细胞仪分析、免疫组织化学等技术方法观测不同浓度 TIMP-3 作用下人脐静脉内皮细胞增殖活性的变化。（2）在第二部分动物实验中,建立原位大鼠腹主动脉移植动物模型,将大鼠分为 2 组:异系（SD-Wistar）移植组和同系（Wistar-Wistar）移植组。分别于术后 3d、1、2、4、8w 活杀取标本,采用形态学观察、免疫组织化学 SP 染色法测定移植段腹主动脉内 MMP-1、TIMP-1,3 的表达、应用 Northern 杂交定量分析 MMP-2 表达。（3）在第三部分动物实验中,将原位大鼠腹主动脉移植动物模型分为 3 组:异系重庆医科大学硕士研究生学位论文 -.5.-（SD-Wistar）移植组 A、B,同系（Wistar-Wistar）移植组 C。A 组于移植主动脉段转染 TIMP-3 质粒,分别于术后 3d、1、2、4、8w 活杀取标本,采用形态学观察,免疫组织化学 SP 染色法测定移植段腹主动脉内 MMP-2、TIMP-2,3 及 Fas 的表达,TUNEL 法测定凋亡指数（AI）,Northern 杂交定量分析 MMP-2 表达,酶图分析术后 MMP-2的活性。结 果 （1）在第一部分细胞培养实验中,我们观察到:①不同浓度（10～100 ng/ml）的 TIMP-3 处理 HUVEC 细胞不同时间（1～7d）后,生长均有显著抑制作用且呈现明显的剂量和时效依赖关系。②经 TIMP-3 处理后,HUVEC 细胞增殖活性降低,主要表现为有丝分裂计数降低,细胞的生长抑制率及移行抑制率增加。③细胞生长减慢,TIMP-3 促进内皮细胞从 G1 期进入 S 期;抑制细胞从 G2 期进入M 期;同时促进细胞的凋亡等。（2）在第二部分动物实验中,我们发现:①术后 2～8w 异系移植组移植段腹主动脉内膜厚度较同系移植组显著增生（P<0.05）。②同系移植组 MMPS、TIMPS 较低,峰值均出现于术后 2～4w;异系移植组 MMP-1,2、TIMP-1表达显著增加,前两者峰值出现于术后第 2w,而 TIMP-1 峰值出现于术后第 4w。③TIMP-3 在各组中表达无显著差异,均较低,仅见于细胞外基质中。（3）在第三部分动物实验中,我们发现:①移植段腹主动脉内膜厚度增生程度由强到弱依次为 B、A、C 组②同系移植组 MMP-2 较低,MMP-2、TIMP-2 峰值均出现于术后第 4w; B 组 MMP-2 表达显著增加,峰值出现于术后第 2w;A 组与术后 1、2wTIMP-3 表达(1.7±1.1
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