论文摘要
土豆中含有一种分子量4200Da的蛋白酶抑制剂—羧肽酶抑制剂（carboxypeptidase inhibitor, CPI）,能专一抑制人血浆羧肽酶B（carboxypeptidaseB, CPB）,后者也称凝血酶活化的纤溶抑制剂（thrombin-activatable fibrinolysisinhibitor, TAFI）。被激活的TAFI（TAFIa）能抑制纤溶酶原生成纤溶酶,从而抑制纤溶系统的启动。CPI作为TAFIa的特异性抑制物,极有可能成为理想的辅助溶栓药物,克服目前临床溶栓药物使用过程中安全剂量过窄、容易引起出血的缺陷。本文通过改进CPI生物活性检测试验,建立了一种稳定快速检测CPI生物活性的方法。该反应体系羧肽酶A（Carboxypeptidase A,CPA）浓度为16mg/L,CPA作用底物浓度为1mmol/L,本试验方法的灵敏度为1.04mg/L,可测范围为1.85-6.63 mg/L。为了定量测定CPI,我们建立了CPI的放射免疫分析方法。采用CPI免疫家兔后产生的CPI抗血清,经硫酸铵沉淀,得到CPI多克隆抗体。用氯胺-T法制备125I-CPI,采用双抗体聚乙二醇混合法进行CPI的放射免疫测定。该方法的批内和批间变异（CV）分别为10.2 %和7.4 %,检测灵敏度为1.5μg/L,平均回收率为104 %,可测范围为7～104μg/L,ED50为17.1μg/L。根据所建立的CPI活性和定量检测方法,我们对提取介质、浓缩方法、离子交换和分子筛等进行优化,从320克土豆中提取了约20mgCPI,产品通过放射免疫方法检测相对纯度约90%,CPI得率达到50.9%。该方法制备成本低,花费时间短,为CPI的产业化奠定了很好的基础。