论文摘要
组织工程技术出现于上世纪80年代,它的出现标志着医学器官移植开始步入器官再造的新时代。作为组织工程研究的重要分支,软骨组织工程技术近年来发展迅速,取得了许多重要的成果,但同时也存在一些关键问题亟待解决,其中首要的问题是研制开发新型载体支架。本文首次将多聚羟基烷酸类材料羟基丁酸-羟基辛酸共聚酯（PHBHOx）应用到软骨组织工程载体支架的制备当中,以其为主体材料,复合脱细胞软骨基质（ACM）进行软骨组织工程支架的制备,并对支架的各项性能进行检测和评估,以期制备出各项性能满足软骨组织工程要求的支架,为利用组织工程技术修复软骨损伤拓展新的材料来源。我们首先在无菌条件下切取猪膝关节表面透明软骨,然后采用非离子型去污剂TritonX-100、低渗Tris-HCl以及Dna酶和Rna酶等联合进行脱细胞处理并通过HE、Masson和甲苯胺蓝染色检测脱细胞效果。将上述处理过的软骨薄片低温粉下粉碎后与PHBHOx以不同比例[0%（对照组）、2%、4%、6%、8%、10%]混合均匀,以事先筛分好的粒径为100-300um的NaCl晶体作为致孔剂,采用溶剂浇铸-颗粒沥滤技术制备支架。之后对所制备支架的孔径、孔隙率、亲水性、降解性、降解液PH值稳定性、生物力学强度等性能进行检测并依据软骨组织工程支架标准筛选出性能最优支架。分离培养猪关节软骨细胞,选取第3代细胞进行细胞-支架体外复合培养试验,在培养至2周时,利用扫描电镜观察软骨细胞在支架上的黏附生长情况,MTT比色法测定细胞在支架上的存活状态并对测定结果做出相应分析。研究结果显示,HE染色证明采用联合脱细胞方法有效地脱去了软骨细胞,MASSON和甲苯胺蓝染色证明软骨中细胞外基质成份（胶原和糖胺聚糖）得到了保留。扫描电镜观察可见支架呈三维连通的海绵状结构,图像分析仪测得支架平均孔径为206.91±52.33um,比重法测得支架孔隙率介于（71.51±4.66）%至（83.53±3.21）%之间,亲水性均在100%以上,体外降解实验表明支架降解性能突出、降解液pH值稳定,电子万能试验机测得支架生物力学强度介于（3.20±0.41）MPa至（7.90±0.22）MPa之间,且上述性能均可通过调整致孔剂以及材料间的复合比例而改变。利用酶组织消化法提取的猪关节软骨细胞,数量大,成活率高,是一种较为可靠的种子细胞培养方法。软骨细胞与支架在体外复合培养至2周时,扫描电镜观察可见细胞在支架上粘附较为紧密,部分细胞已伸出伪足,在支架上延伸、铺展,MTT比色法证实软骨细胞在支架内生长良好。上述研究结果表明,以羟基丁酸-羟基辛酸共聚体为主体材料,复合脱细胞软骨基质构建的复合材料支架各项性能基本符合软骨组织工程对支架的要求,有望成为软骨组织工程新的载体材料。
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标签：羟基丁酸羟基辛酸共聚体论文; 脱细胞软骨基质论文; 软骨组织工程论文; 支架论文;