新生小鼠卵巢组织玻璃化冷冻保存与异体异位移植研究

论文摘要

卵巢冷冻和移植被认为是将来建立哺乳动物卵子库的一项新技术。本实验将利用玻璃化冷冻方法开展小鼠新生胎儿卵巢组织冷冻保存与移植研究,为建立家畜卵巢组织冷冻保存与移植技术奠定基础,探索卵巢组织玻璃化冷冻保存的方法和较理想的冷冻保护液。本研究采用EG和DAP作为冷冻保护剂,1日龄小鼠新生胎儿卵巢通过2种不同的冷冻保存剂和2种不同的冷冻保存方法处理,分为DAP冻存管法玻璃化冻存组、DAP微滴法玻璃化冻存组、EG冻存管法玻璃化冻存组和EG微滴法玻璃化冻存组。冻存卵巢复苏后移植到昆明系雄性小鼠受体肾囊下,于移植21d、28d后回收卵巢移植体,采用形态学、组织学、和RT-PCR等方法对卵泡发育、卵母细胞生长及卵泡发育相关基因的表达进行研究。1.102只雄性受体鼠接受了卵巢移植,共移植1日龄小鼠卵巢207个;能有效回收移植卵巢的受体鼠为72只,受体总有效率分别为70.5%;有效回收移植卵巢113个,卵巢总回收率为54.5%。所有组移植卵巢显著生长增大（P＜0.01）,其中EG微滴法玻璃化冷冻保存卵巢后行移植28d卵巢发育最好。2.冻存后移植卵巢能够在雄性在位睾丸受体内完成原始卵泡的形成、募集和生长发育;移植后21-28d回收的卵巢移植体中能观察到各级生长卵泡发育,没有观察到黄体。3.从21dDT,28dDT,21d-ET和28d-ET组卵巢移植体中回收有腔卵泡的卵母细胞数量分别为12.6±7.3、8.8±8.6、10.1±2.4和35.0±50.3个,各组间差异不显著（P＞0.05）,其中在28d-ET组中有2个卵巢的卵母细胞产量高达134和55个。4.正常卵巢、移植卵巢和冷冻复苏移植卵巢均可检测到卵泡生长和闭锁相关基因BAX和P450—arom的表达。表明小鼠卵巢冷冻复苏移植到雄性受体肾囊下,卵泡生长和闭锁的方式可能与正常卵巢一致,小鼠异体异位移植卵巢卵泡具有正常生长发育和成熟的能力。卵巢组织冷冻可以获得良好的冷冻保存效果;异体异位移植冷冻复苏1日龄小鼠卵巢能够存活、正常生长;移植体通过机械化分离能够获得一定量的卵母细胞。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 卵巢的冷冻保存
• 2 玻璃化冷冻
• 3 卵巢移植
• 4 小结与展望
• 5 本研究的目的意义
• 第二章 小鼠玻璃化冷冻保存卵巢移植体在雄性体内生长与卵泡发规律的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 玻璃化冷冻保存和异体异位移植卵巢BAX、P450-arom基因表达的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录A 英文缩写名词索引
• 致谢
• 作者简历