论文摘要
盐酸苯环壬酯（phencynonate hydrochloride，PCH）和盐酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochloride，PH）是军事医学科学院毒物药物研究所发明的新型抗胆碱药，盐酸苯环壬酯对晕动病（motion sickness，MS）具有防治作用，但盐酸苯环壬酯的不良反应主要是口干和思睡，盐酸苯环壬酯分子结构中含有一个手性中心，具有R（-）-和S（+）-型两个光学异构体。盐酸苯环壬酯的左旋体[R（-）-PCH]为其活性异构体，与M受体的亲和性强于消旋体和右旋体S（+）-PCH，因此，评价盐酸苯环壬酯及其光学异构体对晕动病的防治作用，在兔逆向转圈综合症模型中盐酸苯环壬酯左旋体[R（-）-PCH]的ED50值为4.01，外消旋体的ED50值为8.94，两者的ED50值比为1：2.23，而盐酸苯环壬酯的右旋体[S（+）-PCH]在34mg/kg没有表现出明显的抗晕动病效果（p＞0.05）；在家猫晕动病样综合症模型中，盐酸苯环壬酯左旋体[R（-）-PCH]ED50值为0.07，外消旋体的ED50值为0.58，两者的ED50值比为1：8.06，而右旋体[S（+）-PCH]在3.0mg/kg没有表现出明显的抗晕动病效果（p＞0.05）。盐酸苯环壬酯的左旋体抗晕动病效果明显强于外消旋体和右旋，将来可能会成为抗晕动病的新药。盐酸戊乙奎醚具有两个手性中心，四个手性化合物RR’，RS’，SR’和SS’，其中RR’和SR’为M受体的活性异构体，运用稳定转染表达人M1，M3及M4亚型基因的中国仓鼠卵细胞，通过放射性配基-受体结合实验，研究盐酸戊乙奎醚两个活性异构体RR’和SR’对M受体亚型M1，M3和M4的选择性作用，SR’-PH与M1，M3，M4亚型的亲和性：M4（Ki=9.1nM）＞M1（Ki=11.412nM）＞M3（Ki=53.668nM），RR’-PH与M受体亚型的亲和性：M3（Ki=0.022nM）＞M1（Ki=0.091nM）＞M4（Ki=0.136nM）。SR’-PH对M4受体亚型的选择性相对较M1和M3高；RR’-PH对M3受体亚型的选择性相对较M1和M4高。CADASIL由Notch3基因突变引起，Notch3基因定位在第19号染色体短臂上，由33个外显子组成，其编码的Notch3受体有2321个氨基酸残基。70％～80％的Notch3基因突变发生在外显子3和4，PCR扩增Notch341-656及Notch3228-656Notch3228-656基因，将其插入pGEX-6p-2载体中，成功构建出重组原核表达载体pGEX-6p-2-Notch341-656及pGEX-6p-2-Notch3228-656，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）20℃，14h诱导，SDS-PAGE及凝胶扫描分析GST融合蛋白的表达，纯化目的蛋白，免疫BAB1/C小鼠，制备单克隆抗体，现准备细胞融合。
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