论文题目: 免疫捕捉PCR技术在严重传染病快速检测中的应用
论文类型: 硕士论文
论文专业: 生化与分子生物学
作者: 黄建炜
导师: 彭宣宪
关键词: 免疫捕捉技术,严重传染病,快速检测
文献来源: 厦门大学
发表年度: 2005
论文摘要: 免疫捕捉PCR技术(Immunocaptured PCR ,ic-PCR)是利用免疫捕捉法对传染病病原的高效富集,结合PCR技术特异扩增,是理想的快速诊断方法之一。本文探讨ic-PCR法在四种严重传染病病原:霍乱弧菌(VC)、大肠埃希氏菌O157(E.coli O157)、SARS冠状病毒和流感病毒(AIV)检测中的应用。1.三种免疫捕捉法:微孔板(Microwell)、200ulPCR管(microtube)和免疫磁珠(IMS),均可从环境样品和人体样品中特异捕捉霍乱弧菌(VC)、大肠埃希氏菌O157(E.coli O157)、SARS冠状病毒和流感病毒(AIV),较传统的分离培养方法可节省大量时间。免疫磁珠(IMS)法因可处理的样品量大,反应动力学特性更佳,是最合适的免疫捕捉方法。2.细菌的检测:在O1、O139群霍乱弧菌的群特异性抗原基因(rfb)和肠毒素基因(ctx)上,设计3对引物进行多重PCR,一次PCR反应即可检测出霍乱弧菌,区分血清群别及是否为流行毒株。PCR扩增序列与预计序列完全一致,检测限低于100cfu/ml;根据大肠埃希氏菌O157(E.coli O157)的rfb基因设计的巢式PCR引物扩增,可特异扩增497bp片段,序列与S83460完全一致,检测限约102 cfu/ml,免疫磁珠(IMS)法略高于200ulPCR管(microtube)法。3. SARS冠状病毒的检测:微孔板(Microwell)法捕捉的病毒颗粒,经热裂解后荧光RT-PCR检测SARS病毒RNA的保守序列(15250-15650)片段,临床标本检测未出现假阳性结果,避免了直接提取标本总RNA进行荧光RT-PCR检测时产生假阳性的干扰,检测限10~1copies,灵敏度比推荐用的荧光RT-PCR试剂盒标称值提高了10倍,在临床病人的诊断上具有重要的参考意义。4.流感病毒(AIV)的检测:流感病毒(AIV)对人类危害最大的主要是A/H1和A/H3两型。200ul PCR管(microtube)结合RT-PCR扩增NP基因,检测限约为10~2个病毒粒子,含漱液检测未出现非特异扩增,检出率比细胞培养法提高约50%。但以免疫磁珠法结合RT-PCR扩增,灵敏度反而较microtube法低100倍,这可能与免疫磁珠的反应活性及RNP颗粒的完整性有关。因此我们设想ic-RTPCR法检测流感病毒的更理想策略是,以衣壳蛋白MP的抗体制备免疫磁
论文目录:
中文摘要
英文摘要（Abstract）
缩略语表
第一章 序言
一、当前传染病的流行态势及控制研究技术策略
二、霍乱与霍乱弧菌
三、肠出血性大肠杆菌病与EHEC 0157
四、SARS与SARS病毒
五、流感与流感病毒
六、免疫捕捉PCR 技术的应用研究进展
第二章 实验室生物安全设施、重要仪器设备和常用溶液的配制
一、实验室生物安全设施
二、主要仪器设备
三、常用溶液配制
第三章 免疫捕捉PCR技术在四种严重传染病快速检测中的应用
一、免疫捕捉法多重PCR 技术检验和鉴定霍乱弧菌
二、免疫捕捉PCR 法快速检测大肠埃希氏0157: H7 的研究
三、免疫捕捉荧光RT-PCR 法检测SARS 冠状病毒
四、免疫捕捉法RTPCR 检测甲型流感病毒
五、小结
参考文献
附件
已发表论文
致谢
发布时间: 2006-12-11
参考文献
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