论文摘要
目的利用p15-shRNA表达载体干扰周期相关基因p15，探讨细胞周期干扰对HepG2细胞株顺铂耐药的影响。方法采用浓度递增法用顺铂（Cisplatin，CDDP）逐步诱导肝癌细胞株HepG2耐药并建立动态耐药模型HepG2/CDDP/2.0；采用脂质体法将p15-shRNA（Y1,Y2,Y3）和阴性对照shRNA-F转染至HepG2/CDDP/2.0细胞，RT-PCR筛选最佳干扰片段；MTT法检测转染前后HepG2/CDDP/2.0对细胞生长的影响、流式细胞仪分析转染后HepG2/CDDP/2.0细胞的周期分布；Western blot检测p15、Bax、Bcl-2的蛋白表达。结果（1）成功建立了肝癌细胞的动态耐药模型（2）RT-PCR检测结果显示shRNAY3干扰效果最好（3） MTT结果显示shRNA转染HepG2/CDDP/2.0细胞后，细胞存活率明显增加（4）流式细胞仪分析结果显示p15-shRNA转染HepG2/CDDP/2.0细胞后，G1期细胞比例明显减少（5） Western blot结果显示p15表达降低、Bax表达降低、Bcl-2表达增加。结论在HepG2/CDDP/2.0耐药过程中，随着耐药时间的延长，细胞G1期比例增加。抑制p15表达可明显降低细胞G1期的比例，同时由于Bax表达降低、Bcl-2表达增加，细胞凋亡降低，利用shRNA抑制p15表达，改变HepG2/CDDP/2.0细胞周期未能明显改变其对顺铂的耐药性。
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