本文主要研究内容
作者李梦银（2019）在《鱼类主要过敏原小清蛋白金磁免疫层析试纸条的研制》一文中研究指出：鱼类是人类重要的食物来源,不仅味道鲜美而且营养丰富。新鲜鱼肉中富含15%20%的全价蛋白,1%10%的脂肪,并富含重要的不饱和脂肪酸。我国是水产养殖大国,占世界养殖水产品产量的70%以上,淡水渔业总面积达1760万公顷占国土面积的1.8%。鱼类及其制品含有丰富的营养,同时也是FAO及WHO认定的导致人类过敏的八大类食物之一。其中鱼肉中的小清蛋白（parvalbumin,PV）被视为主要的过敏原,因此开展针对鱼类及其制品中小清蛋白强特异性、高灵敏度的检测具有重要的理论和现实意义。本文研究主要包括小清蛋白单克隆抗体的制备及鉴定、金磁复合纳米微粒的制备以及小清蛋白金磁免疫层析检测方法的建立。具体研究内容如下:1.小清蛋白单克隆抗体的制备以高纯度的PV免疫7只BALB/c小鼠,利用间接ELISA方法测小鼠抗血清效价,获取效价最高的小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,获得杂交瘤细胞。间接ELISA方法筛选阳性孔,有限稀释法进行3次亚克隆得到分泌同质的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法大量制备单抗。采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗腹水,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定单克隆抗体纯度,并采用Western-blotting、考马斯亮蓝染色法分别检测单抗特异性及抗体浓度,结果显示PV单克隆抗体具备良好的特异性,最后通过商业化试剂盒检测PV单抗亚类为IgG1型。2.小清蛋白金磁免疫层析试纸条的定性检测采用一锅法制备氨基化的磁性微粒Fe3O4-PEI,之后在其表面包覆两层Au颗粒,制备金磁（Fe3O4/Au）复合微粒,金磁复合微粒形貌呈圆形,粒径均一,粒径约80nm。金磁复合微粒与小清蛋白单克隆抗体进行偶联,制备金磁免疫探针,并优化了金磁探针的偶联的最佳pH值、抗体用量、反应时间、缓冲液体系等条件。按照试纸条组装方式组装得到小清蛋白金磁探针免疫层析试纸条,并探究样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜的材料选择、处理液最佳配方及最佳处理条件、T/C线最佳划线浓度等试纸条组装条件优化。并进行标准品的检测,结果表明所制备的金磁免疫层析试纸条具有良好的定性功能,可视化检测最低检测浓度为4ng/ml,检测特异性及检测稳定性良好。3.小清蛋白金磁免疫层析试纸条定量检测通过建立T/C比值的定量方法提高金磁金免疫层析试纸条的检测灵敏度;同时结合现实工作的实际情况,从操作简便性、前处理的时间消耗以及回收率等角度比较了7种鱼肉样品前处理方法优缺点。在此基础上建立了金磁免疫层析试纸条T/C比值法定量分析鱼肉中小清蛋白的快速检测方法。
Abstract
yu lei shi ren lei chong yao de shi wu lai yuan ,bu jin wei dao xian mei er ju ying yang feng fu 。xin xian yu rou zhong fu han 15%20%de quan jia dan bai ,1%10%de zhi fang ,bing fu han chong yao de bu bao he zhi fang suan 。wo guo shi shui chan yang shi da guo ,zhan shi jie yang shi shui chan pin chan liang de 70%yi shang ,dan shui yu ye zong mian ji da 1760mo gong qing zhan guo tu mian ji de 1.8%。yu lei ji ji zhi pin han you feng fu de ying yang ,tong shi ye shi FAOji WHOren ding de dao zhi ren lei guo min de ba da lei shi wu zhi yi 。ji zhong yu rou zhong de xiao qing dan bai （parvalbumin,PV）bei shi wei zhu yao de guo min yuan ,yin ci kai zhan zhen dui yu lei ji ji zhi pin zhong xiao qing dan bai jiang te yi xing 、gao ling min du de jian ce ju you chong yao de li lun he xian shi yi yi 。ben wen yan jiu zhu yao bao gua xiao qing dan bai chan ke long kang ti de zhi bei ji jian ding 、jin ci fu ge na mi wei li de zhi bei yi ji xiao qing dan bai jin ci mian yi ceng xi jian ce fang fa de jian li 。ju ti yan jiu nei rong ru xia :1.xiao qing dan bai chan ke long kang ti de zhi bei yi gao chun du de PVmian yi 7zhi BALB/cxiao shu ,li yong jian jie ELISAfang fa ce xiao shu kang xie qing xiao jia ,huo qu xiao jia zui gao de xiao shu 。qu mian yi xiao shu de pi xi bao yu SP2/0gu sui liu xi bao jin hang xi bao rong ge ,huo de za jiao liu xi bao 。jian jie ELISAfang fa shai shua yang xing kong ,you xian xi shi fa jin hang 3ci ya ke long de dao fen bi tong zhi de za jiao liu xi bao zhu 。cai yong xiao shu ti nei you sheng fu shui fa da liang zhi bei chan kang 。cai yong xin suan -liu suan an chen dian fa chun hua chan kang fu shui ,SDS-PAGEning jiao dian yong jian ding chan ke long kang ti chun du ,bing cai yong Western-blotting、kao ma si liang lan ran se fa fen bie jian ce chan kang te yi xing ji kang ti nong du ,jie guo xian shi PVchan ke long kang ti ju bei liang hao de te yi xing ,zui hou tong guo shang ye hua shi ji he jian ce PVchan kang ya lei wei IgG1xing 。2.xiao qing dan bai jin ci mian yi ceng xi shi zhi tiao de ding xing jian ce cai yong yi guo fa zhi bei an ji hua de ci xing wei li Fe3O4-PEI,zhi hou zai ji biao mian bao fu liang ceng Auke li ,zhi bei jin ci （Fe3O4/Au）fu ge wei li ,jin ci fu ge wei li xing mao cheng yuan xing ,li jing jun yi ,li jing yao 80nm。jin ci fu ge wei li yu xiao qing dan bai chan ke long kang ti jin hang ou lian ,zhi bei jin ci mian yi tan zhen ,bing you hua le jin ci tan zhen de ou lian de zui jia pHzhi 、kang ti yong liang 、fan ying shi jian 、huan chong ye ti ji deng tiao jian 。an zhao shi zhi tiao zu zhuang fang shi zu zhuang de dao xiao qing dan bai jin ci tan zhen mian yi ceng xi shi zhi tiao ,bing tan jiu yang pin dian 、jie ge dian 、xiao suan qian wei su mo de cai liao shua ze 、chu li ye zui jia pei fang ji zui jia chu li tiao jian 、T/Cxian zui jia hua xian nong du deng shi zhi tiao zu zhuang tiao jian you hua 。bing jin hang biao zhun pin de jian ce ,jie guo biao ming suo zhi bei de jin ci mian yi ceng xi shi zhi tiao ju you liang hao de ding xing gong neng ,ke shi hua jian ce zui di jian ce nong du wei 4ng/ml,jian ce te yi xing ji jian ce wen ding xing liang hao 。3.xiao qing dan bai jin ci mian yi ceng xi shi zhi tiao ding liang jian ce tong guo jian li T/Cbi zhi de ding liang fang fa di gao jin ci jin mian yi ceng xi shi zhi tiao de jian ce ling min du ;tong shi jie ge xian shi gong zuo de shi ji qing kuang ,cong cao zuo jian bian xing 、qian chu li de shi jian xiao hao yi ji hui shou lv deng jiao du bi jiao le 7chong yu rou yang pin qian chu li fang fa you que dian 。zai ci ji chu shang jian li le jin ci mian yi ceng xi shi zhi tiao T/Cbi zhi fa ding liang fen xi yu rou zhong xiao qing dan bai de kuai su jian ce fang fa 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自上海师范大学的李梦银，发表于刊物上海师范大学2019-06-17论文，是一篇关于小清蛋白论文,单克隆抗体论文,金磁免疫层析论文,定量检测论文,上海师范大学2019-06-17论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自上海师范大学2019-06-17论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：小清蛋白论文; 单克隆抗体论文; 金磁免疫层析论文; 定量检测论文; 上海师范大学2019-06-17论文;