论文摘要
研究目的：测定人单核细胞系THP-1细胞在炎症刺激时肿瘤坏死因子α（TNF-a）表达分泌的规律,确定其分泌峰值时间；研究TNF-α基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态与蛋白分泌和基因表达的关系；探讨TNF-α基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态影响其基因表达的调控因素。研究方法：采用酶联免疫分析（ELISA）法检测人单核细胞系THP-1细胞在未受到炎症因子刺激时,其TNF-α表达分泌水平；使用终浓度为1μg/ml的脂多糖（LPS）刺激人单核细胞系THP-1细胞,采用ELISA法检测刺激不同时间时细胞培养液上清TNF-α分泌水平。对不同刺激时间分泌量与未刺激时分泌量进行比较,确定THP-1细胞在受到终浓度为1μg/ml的脂多糖刺激后,TNF-α分泌高峰时间和分泌下降时间。独立进行4次上述测定,结果以刺激不同时间的分泌量与未刺激时分泌量比值的平均数±标准误表示。对刺激后分泌高峰时间和分泌下降时间其分泌水平进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。同时采用实时定量PCR方法测定THP-1细胞TNF-α基因表达水平。采用重亚硫酸盐转化基因测序法测定THP-1细胞在未受到炎症刺激时TNF-α基因启动子区域的甲基化状态。使用终浓度为1μg/ml LPS刺激THP-1细胞,采用重亚硫酸盐转化基因测序法测定THP-1细胞在LPS刺激分泌高峰时TNF-α基因启动子区域的甲基化状态,以及受刺激后分泌下降时TNF-α基因启动子区域的甲基化状态。每个时间点样本选取5个克隆进行测序,结果以所测得CpG双核苷酸结构甲基化数占扩增区域总CpG双核苷酸结构数的百分率表示。采用卡方检验对测序结果进行统计学分析,P＜0.05为差异具有统计学意义。将未刺激时、刺激分泌高峰时期、刺激分泌下降时期TNF-α表达分泌量与对应时间点其基因启动子区域的甲基化状态进行对比。使用实时定量PCR方法测定甲基化CpG结合蛋白表达量。并与相应时间点TNF-α基因启动子区域甲基化状态及TNF-α分泌的关系进行研究。实验结果：受到终浓度为1μg/ml的LPS刺激后,THP-1细胞迅速开始产生TNF-α,1 h过后升幅明显增加,在4h达到分泌高峰水平,浓度为未刺激时的48.9±1.06倍。之后快速下降,至8h,已有明显下降,浓度为未刺激时的36.3±1.65倍。至12h,浓度已降至峰值一半以下。刺激4h与未刺激时相比,TNF-α分泌量明显升高（P＜0.01）,其差别有统计学意义。刺激8h与刺激4h相比,TNF-α分泌量明显下降（P<0.01）,其差别有统计学意义。TNF-α基因启动子区域无典型CpG岛结构,其启动子-344bp到+57 bp区域内,存在12个散在CpG双核昔酸结构,其中-344bp到转录起始位点（TSS）区域内,存在11个散在CpG双核苷酸结构。未受到LPS刺激时,该11个散在CpG双核苷酸均处于甲基化状态；刺激4h时,有4个处于甲基化状态；刺激8h时,有9个处于甲基化状态。未刺激时,5个克隆总体甲基化率为100%,刺激4h时,5个克隆总体甲基化率为21.8%,刺激8h时,5个克隆总体甲基化率为41.8%。刺激4h时与未刺激时相比,TNF-α基因启动子区域甲基化率明显下降,差别具有统计学意义（P<0.01）；刺激8h时与刺激4h时相比,TNF-α基因启动子区域甲基化率明显上升,差别具有统计学意义（P＜0.05）。各时间点甲基化率与相应时间点TNF-α分泌量比值之间呈明显负相关（r=-0.99,P<0.01）。未受到LPS刺激时,甲基化结合蛋白（MBD1、MBD2、MeCP2）表达量均较高；刺激4h后,MeCP2表达量明显降低。MBD1、MBD2表达量较低；刺激8h后,MBD1、MBD2、MeCP2表达量又升高。实验结论：1. THP-1细胞TNF-α表达分泌量与LPS刺激明显相关。未受到LPS刺激时,TNF-α表达分泌量较低。受到LPS刺激后迅速开始产生TNF-α,1h过后升幅明显增加,在4h时达到分泌高峰水平,之后快速下降,至8h时,已有明显下降。TNF-α表达分泌呈现快速开始,快速升高并快速下降的规律。2. TNF-α基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态与THP-1细胞是否受到炎症刺激,以及受刺激时间明显相关。即未刺激时,总体甲基化水平很高；刺激4h,总体甲基化水平较低；刺激8h,总体甲基化水平较高。3. THP-1细胞TNF-α表达分泌量与TNF-α基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态呈明显负相关性。4. TNF-α基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态可能通过甲基化CpG结合蛋白影响其基因表达。
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- [2].长链非编码RNA XLOC_002319在食管鳞癌中表达及其甲基化状态[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2016(05)
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- [4].EGFR基因启动子区甲基化状态分析[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2010(06)
- [5].T系和B系急性淋巴细胞白血病ID4甲基化状态分析[J]. 中国当代儿科杂志 2010(12)
- [6].非编码长链RNA LOC100130476在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态[J]. 肿瘤 2015(08)
- [7].BCSG1甲基化状态与乳腺癌的相关性[J]. 中国肿瘤外科杂志 2009(04)
- [8].转录因子SOX7基因在贲门腺癌中的异常表达及其甲基化状态[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2014(06)
- [9].IGFBP3基因在食管鳞状细胞癌中的表达及甲基化状态[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2015(04)
- [10].肺癌及癌旁组织中经典Wnt信号途径相关基因的甲基化状态观察[J]. 山东医药 2008(15)
- [11].配对盒家族基因1甲基化状态与宫颈组织病变的相关性研究[J]. 中国农村卫生事业管理 2014(05)
- [12].应用MSAP方法检测鸡不同组织基因组的甲基化状态[J]. 遗传 2011(06)
- [13].急性髓系白血病分泌型卷曲相关蛋白5基因启动子区甲基化状态研究[J]. 医学研究杂志 2011(03)
- [14].调节性T细胞的功能与Foxp3基因及组蛋白甲基化状态的研究进展[J]. 中国临床医学 2011(02)
- [15].肺癌组织中AKAP12启动子区域甲基化状态研究[J]. 西藏大学学报(自然科学版) 2016(01)
- [16].MicroRNA-203在人食管鳞癌组织和细胞中的表达及其基因的甲基化状态[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2014(04)
- [17].启动子区域甲基化状态对THP-1细胞肿瘤坏死因子α分泌的影响[J]. 中国病理生理杂志 2011(06)
- [18].长链非编码RNA XLOC_008370在贲门腺癌中的表达及其甲基化状态[J]. 肿瘤 2016(06)
- [19].长链非编码RNA XLOC_005009在食管鳞状细胞癌中的表达及其甲基化状态[J]. 中国肿瘤 2017(03)
- [20].β-环连蛋白抑制基因2甲基化状态对贲门腺癌发生发展的影响及机制[J]. 中国肿瘤 2016(08)
- [21].产妇及新生儿IGF2甲基化状态及其与新生儿出生结局的关系[J]. 中国妇幼保健 2011(07)
- [22].肝癌细胞中OY-TES-1基因启动子的甲基化状态[J]. 世界华人消化杂志 2011(21)
- [23].应用Methylight法检测胃癌病人p16基因的甲基化状态[J]. 临床检验杂志(电子版) 2012(02)
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- [25].SLE患者T淋巴细胞TNFSF7基因启动子区域的甲基化状态[J]. 中国皮肤性病学杂志 2012(11)
- [26].长链非编码RNA ZNF667-AS1在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其DNA甲基化状态的研究[J]. 肿瘤防治研究 2018(12)
- [27].印记基因H19在不同质量精子和胚胎中的甲基化状态[J]. 昆明医科大学学报 2018(06)
- [28].食管癌前病变DLEC1基因启动子区的甲基化状态研究[J]. 热带医学杂志 2018(08)
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