老鹰茶总黄酮中黄酮类单体对TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖的影响及部分机制研究

论文摘要

肝纤维化是一种严重危害人类健康的疾病,是细胞外基质（Extracellur matrix, ECM）合成和降解失衡,引起过多的ECM在肝脏沉积所致。肝星状细胞（Hepatic stellate cells, HSC）的激活、增生、转化是肝纤维化的中心环节,其中活化的HSC大量增殖和胶原的过度生成是导致ECM大量沉积的重要原因。老鹰茶,又名豹皮樟,系樟科木姜子属毛豺皮樟（Litsea coreana leve）的叶,其中黄酮类成分是老鹰茶的主要成分。药理学实验证明老鹰茶总黄酮（Total flavonids of Litsea coreana L, TFLC）具有抗氧化、降糖、降脂、抗肝纤维化、抗炎及免疫调节等功效。本课题组前期分离出四个黄酮苷类化合物,分别为:槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（I）、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（II）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅲ）、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷（IV）。因此,本实验通过探讨黄酮类单体是否能通过调节TGF-β1来改善肝纤维化,从而进一步了解老鹰茶总黄酮抗肝纤维化的作用机制。具体研究内容包括以下两个部分:1.老鹰茶总黄酮中四种黄酮类单体的提取与分离以黄酮含量为评价指标,采用L9（33）正交试验对老鹰茶总黄酮水提取工艺进行优化,结果优化的生产工艺为用12倍量水提取3次,每次1小时。本文采用非极性的D101型大孔吸附树脂纯化老鹰茶总黄酮,采用该工艺纯化TFLC后,紫外分光光度法测定总黄酮回收率>90 %,平均纯度为48.59%。本文采用正、反相硅胶色谱法反复对老鹰茶总黄酮进行分离,分别得四种黄酮类化合物,经与已知化合物比较,鉴定为:槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。2.黄酮类单体对TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖的影响及部分机制的研究本文采取肝脏灌流来分离出正常大鼠的肝星状细胞,并进行培养。此法分离的肝星状细胞得率为2×107/肝,细胞活力及纯度都在90%以上。MTT法检测四种黄酮类单体对HSC增殖的抑制作用,结果发现,四种黄酮类单体在培养24、48及72h时均对HSC的增殖具有不同程度的抑制作用,且山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷在培养48h时对HSC的增殖的抑制作用最强。RT-PCR法检测山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷对TGF-β1诱导的HSC中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Smad2、Smad3及Smad7中mRNA的表达的影响,结果发现,能够明显下调HSC的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Smad2及Smad3中mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 老鹰茶总黄酮中四种黄酮类单体的提取与分离
• 1 材料和仪器
• 2 方法与结果
• 3 讨论
• 第二部分 黄酮类单体对 TGF-β1 诱导的肝星状细胞增殖的影响及部分机制研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述