钇标记多肽及抗体靶向治疗肿瘤的标记偶联过程研究

论文摘要

本实验旨在探索采用放射性核素钇标记单克隆抗体的最佳实验条件和标记方法，以便应用于后继的细胞、动物实验以及最终应用于临床放射免疫治疗。本课题的研究目的是为临床医学提供参考依据。实验采用间接标记法，将核素钇标记到多肽或抗体上，使用的双功能螯合剂为1，4，7，10—四氮杂环十二烷四乙酸(DOTA)及其衍生物异硫氰基苄基—1，4，7，10—四氮杂环十二烷四乙酸(p—SCN—Bz—DOTA)。实验合成了DOTA，并对其中脱除保护基的步骤作出了改进，采用微波解离法替代常规的加热脱除法。反应时间缩短为常规法的1／4000，显著提高了反应效率。将各步反应中间体进行熔点、红外、核磁谱图表征，均与标准物质的相应参数一致，说明合成的产物均为所要合成的目的产物。以DOTA作为双功能螯合剂偶联奥曲肽，鉴于反应副产物较多，产物量相对较少，分离纯化步骤繁琐，未得到较好的偶联、标记效果。更换p—SCN—Bz—DOTA作为双功能螯合剂偶联、标记奥曲肽、单抗，均取得较好的标记效果。奥曲肽的标记率为68.3％。单抗的标记率为68.4％，48小时后再次测定单抗的标记率为60.4％，说明单抗的标记物在体外具有良好的稳定性。本课题的研究可为其过渡到临床研究提供参考依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 放射免疫治疗
• 1.1.1 放免治疗的研究现状
• 1.1.2 RIT存在主要问题
• 1.1.3 RIT的发展
• 1.2 多肽在肿瘤治疗中的应用
• 1.2.1 抗肿瘤多肽的来源
• 1.2.2 多肽的抗肿瘤机制
• 1.2.3 放免治疗中常用的多肽
• 1.3 治疗肿瘤的抗体靶向药物
• 1.3.1 抗体治疗肿瘤的作用机制
• 1.3.2 国内外用于肿瘤治疗的抗体药物的研究现状
• 1.4 双功能螯合剂的研究现状及进展
• 1.5 实验的目的和意义
• 第二章 实验试剂仪器及方法
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 实验试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 检测及分析方法
• 2.2.1 核磁共振谱（NMR）分析
• 2.2.2 薄层色谱（TLC）分析
• 2.2.3 红外光谱（IR）分析
• 2.2.4 紫外光谱（UV）分析
• 2.2.5 熔点（mp）分析
• 第三章 DOTA的合成研究
• 3.1 DOTA合成工艺路线
• 3.2 DOTA合成及纯化过程研究
• 3.2.1 合成N,O,O’—三（对甲苯磺酰基）双（2—羟乙基）胺
• 3.2.2 合成N,N’,N"-三（对甲苯磺酰基）二乙三胺
• 3.2.3 合成N,N’,N"-三（对甲苯磺酰基）二乙三胺—N’,N"—二钠盐
• 3.2.4 合成1,4,7,10-四（对甲苯磺酰亚胺）-四氮杂环十二烷
• 3.2.5 合成1,4,7,10—四氮杂环十二烷盐酸盐
• 3.2.6 合成终产物DOTA
• 第四章 DOTA与苯丙氨酸及多肽的偶联
• 4.1 实验部分
• 4.1.1.考察Y离子标记DOTA的条件
• 4.1.2 DOTA与苯丙氨酸的偶联
• 4.1.3 DOTA与奥曲肽的偶联反应
• 4.1.4 p—SCN—Bz—DOTA与奥曲肽的偶联及标记
• 4.1.5 绘制蛋白溶液标准曲线
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 考察Y离子标记DOTA的条件
• 4.2.2 DOTA与苯丙氨酸的偶联
• 4.2.3 DOTA与奥曲肽的偶联反应
• 4.2.4 p—SCN—Bz—DOTA与奥曲肽的偶联及标记结果讨论
• 4.3 结论
• 第五章 P—SCN—BZ—DOTA与单抗的偶联及核素钇标记偶联物
• 5.1 实验部分
• 5.1.1 放射性核素的选择及标记方法
• 5.1.1.1 放射性核素的选择
• 90Y的理化性质及应用'>5.1.1.2 放射性核素⁹⁰Y的理化性质及应用
• 5.1.1.3 标记方法
• 5.1.2 p—SCN—Bz—DOTA偶联标记多克隆抗体
• 5.1.3 p—SCN—Bz—DOTA偶联标记单克隆抗体
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 p—SCN—Bz—DOTA偶联标记多克隆抗体
• 5.2.3 单抗的标记率及其稳定性
• 5.3 本章小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 导师及作者简介
• 北京化工大学 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书