论文摘要
目的:1.研究白藜芦醇对大鼠缺氧心肌细胞的保护作用,以及对SIRT1表达的影响;2.初步探讨白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路。方法:大鼠心肌细胞株H9c2培养48 h后随机分为5组,其中4组为模拟缺血氧组,1组为正常对照组。模拟缺血缺氧组弃去旧培养液,用PBS洗2次去除残余培养基,加入被高纯度氮气饱和的缺氧液,其中①20μmol/L白藜芦醇（resveratrol,Res）干预组:Res用二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）溶解;②Res对照组:用相当于Res溶剂剂量的DMSO作为空白对照;③40mmol/L尼克酰胺（nicotimamide,Nam）干预组:Nam用缺氧液溶解;④Nam空白对照组:不加入Nam。将Res、DMSO及Nam溶液分别调整至所需终浓度后,置于一密闭的有机玻璃盒中,培养皿和有机玻璃盒内空气均用高纯氮气置换,37℃条件下培养;⑤正常对照组:不行任何处理。以上各实验组细胞继续培养24 h后终止培养。试验各组细胞检测指标均相同。RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测Sirt1、Foxo1、p27KIP1、Bim mRNA及其蛋白表达水平的变化;末端脱氧核苷酰基转移酶介导的dUTP切口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick-end labeing,TUNEL）技术分析细胞凋亡;流式细胞仪（flow cytometer,FCM）PI染色法分析细胞凋亡和细胞周期。结果:1.与Res对照组比较,Res干预组细胞的Sirt1 mRNA表达水平升高（P<0.05）,蛋白表达增加（P<0.01）,但均低于正常对照组（P<0.01）。Nam干预组和Nam空白对照组比较,Sirt1 mRNA表达水平下降（P<0.05）,蛋白表达减少（P<0.01）。2.Foxo1 mRNA的表达水平在正常对照组细胞中最高（P<0.01）,Res干预组较Res对照组中的表达水平下降（P<0.01）;Nam干预组与Nam空白对照组细胞中的表达水平比较,差异无统计学意义。在蛋白水平,Res干预组和Res对照组与正常对照组细胞内的表达量比较,差异无统计学意义;而Nam干预组较Nam空白对照组细胞中的表达明显增加（P<0.01）。FOXO1在正常对照组细胞中主要在胞浆表达,模拟缺血缺氧24 h组的细胞在其胞核、胞浆中均有表达。3.Res干预组细胞中,p27KIP1mRNA的表达水平较Res对照组细胞升高（P<0.01）;而与正常对照组细胞相比较,差异无统计学意义;Nam干预组较Nam空白对照组细胞中p27KIP1mRNA的表达水平下降（P<0.01）。在蛋白水平,P27KIP1在各组细胞的胞核、胞浆中都有表达,在正常对照组细胞中的表达量最高（P<0.01）,Res干预组较Res对照组细胞中的表达明显增加（P<0.01）,Nam干预组较Nam空白对照组细胞中的表达明显减少（P<0.01）。4.Bim mRNA及蛋白水平在正常对照组细胞中均最低。与Res对照组比较,Res干预组细胞Bim mRNA的表达水平下降,蛋白表达减少;Nam干预组较Nam空白对照组细胞中Bim mRNA表达水平升高,蛋白表达增加,差异均有统计学意义（P<0.01）。5.TUNEL法检测细胞凋亡率在正常对照组细胞为0.37%,Res干预组（4.76%）较Res对照组（11.60%）降低,Nam干预组（22.73%）较Nam空白对照组（13.42%）升高,差异均有统计学意义（P<0.01）。FCM法分析Sub-G1百分率结果和TUNEL法结果一致。6.FCM法分析,G0+G1期细胞比例在正常对照组中最高（77.74%）,Res干预组（72.73%）比Res对照组（69.07%）高（P<0.05）,Nam干预组（61.88%）较Nam空白对照组（66.95%）明显降低（P<0.01）。结论:1.Res能减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡,可能与上调SIRT1表达有关;2.初步推测Sirt1可能通过对Foxo1及其下游基因Bim﹑p27KIP1的调控,延长心肌细胞的细胞周期,减少其凋亡。
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相关论文文献
- [1].松果菊苷调控Sirt1-FOXO1通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤[J]. 中国药师 2019(11)
- [2].白藜芦醇-Sirt1-Foxo1调控通路对缺氧心肌细胞的保护作用[J]. 心脏杂志 2009(01)