论文摘要
目的:糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）最常见的微血管并发症之一,由DN所引起的终末期肾病发病率呈逐年上升趋势。因而探索DN的发病机制及有效的防治措施是当今倍受肾病学者关注的课题。DN以早期肾小球高滤过,肾小球肥大,导致肾小球系膜区细胞外基质增生,肾小管间质纤维化,最终导致肾小球硬化为主要病理特征。肾小球高滤过是导致糖尿病肾病发生功能与形态学改变的基础,DN发病早期即可出现肾小球滤过率增高。前列腺素系统、肾素-血管紧张素系统是两种主要的血管舒缩系统,参与肾脏血流动力学的改变。前列腺素代谢异常是肾小球高灌注、高滤过的因素之一,并与系膜增生及基质堆积有关。环氧合酶是前列腺素生物合成的关键限速酶,有2种亚型,结构型酶COX-1和诱导型酶COX-2,COX-1活性较稳定,促进生理性前列腺素的合成,COX-2在调节肾脏血供、肾素释放、水盐代谢方面起重要作用,在生理情况下呈低水平表达,但在炎性或病理性刺激下其表达可明显增加。国外最近研究表明,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）增多及氧化应激状态均可使COX-2表达增加,而应用活性氧（ROS）清除剂可以抑制COX-2表达。目前多项研究证明ACEI类药物可以减轻糖尿病大鼠肾脏的氧化应激状态,因此探讨AngⅡ、氧化应激和COX-2的关系以及ACEI类药物是否能通过抑制AngⅡ及氧化应激从而进一步抑制肾组织COX-2表达,可能为临床治疗糖尿病肾病提供新的理论依据。本研究应用糖尿病大鼠模型,采用多种试验方法,测定病理状态下大鼠生化指标的改变,观察COX-2、SOD（抗氧化酶的一种）及TXB2、6-keto-PGF1α（前列腺素TXA2、PGI2尿中代谢产物）在糖尿病大鼠肾脏表达的情况及其与糖尿病肾病发生、发展的关系,同时予以苯那普利进行干预,探讨其保护肾功能的作用机制。方法:选择健康雄性Wistar大鼠60只（体重180-200g）,随机抽取40只腹腔注射链脲佐菌素（60mg/kg,溶于0.1mmol/L柠檬酸缓冲液,浓度为2%,PH值为4.5）制备糖尿病大鼠模型,72小时后尾静脉采血测血糖,试纸法检测尿糖,血糖≥16.7mmol/L,尿糖+++～++++确定为糖尿病大鼠模型。剩余20只为正常对照组（A组）,只注射相当体积的柠檬酸缓冲液。将糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组（B组）和苯那普利干预组（C组）各20只;C组以苯那普利混悬液10mg/kg/d灌胃,A与B组仅给于等量生理盐水灌胃。试验期间大鼠自由进食、水,不使用胰岛素及其它降糖药物。分别于试验开始后4、8周各组任取10只大鼠测定24小时尿蛋白定量、肾重/体重、血糖、血肌酐、尿肌酐及肌酐清除率,放免法测定尿液中TXB2、6-keto-PGF1α含量,对肾脏标本进行光镜观察,应用免疫组织化学、原位杂交方法观察COX-2蛋白和mRNA及SOD蛋白在肾组织的表达情况。结果:在4周及8周,B组血糖、肌酐清除率、肾重/体重、24小时尿蛋白定量较A组均有不同程度升高（P<0.01）,而C组肌酐清除率、24小时尿蛋白定量显著低于同时期的B组（P<0.01）,第8周时,B、C组之间肾重/体重有明显差异（P<0.01）。B组TXB2、6-keto-PGF1α排泄量较A组明显增高（P<0.01）,C组TXB2、6-keto-PGF1α排泄量较B组显著降低（P<0.01）,B组COX-2的蛋白和mRNA表达较A组明显增高（P<0.01,P<0.05）,SOD蛋白表达较A组明显降低（P<0.05）,C组COX-2的蛋白和mRNA表达较同时期B组明显下调（P<0.01,P<0.05）,SOD蛋白表达较B组显著增高（P<0.05）。结论:1、糖尿病大鼠肾组织COX-2表达增加,SOD表达下调,尿液中TXB2、6-keto-PGF1α排泄量增多,提示COX-2及其源性前列腺素参与了糖尿病大鼠肾病的发生发展。2、苯那普利干预治疗后,肾组织COX-2表达减少,SOD蛋白表达增加,降低了病理性TXB2、6-keto-PGF1α的生成,改善了糖尿病大鼠肾脏高灌注、高滤过状态,降低尿蛋白、延缓糖尿病肾病的进展,提示降低AngⅡ水平,抑制氧化应激状态可能是ACEI类药物降低COX-2的表达的作用机制之一。