论文摘要
Shc家族有3个成员：ShcA，ShcB，ShcC。ShcA是其中最早发现的分子，在1992年被发现作为受体蛋白偶联到被激活的表皮生长因子受体EGFR上参与有丝分裂原活化的蛋白激酶MAPK通路，该基因只在神经干细胞和神经前体细胞中表达，但在成年个体中除中枢神经系统外在机体周身表达，ShcB／ShcC只限在成年个体的中枢神经系统中表达。ShcA编码3个分子量相近的蛋白52kDa（p52ShcA）、46kDa（p46ShcA）和66kDa（p66ShcA），它们都具有Shc家族特有的高度保守结构域，即C段Src同源结构域SH2，N段的磷酸酪氨酸结合结构域PTB，和胶原同源区CH1。p52ShcA／p46ShcA共用一个启动子，可以偶联到被激活的受体酪氨酸蛋白激酶RPTK，参与Ras／MAPK通路调节细胞的增殖。p66ShcA是ShcA最长的剪接体，具有特有的N段结构域，称作CH2，在36位包含一个磷酸苏氨酸位点，该位点是一个潜在的磷酸化位点，影响p66ShcA基因的功能。为了研究p66shcA基因如何在神经发育分化过程中启作用，我们以PC12为实验模型，以脂质体法将pEGFP-N1-shcA真核表达载体瞬时转染PC12细胞，流式细胞仪观察细胞周期分布的变化；RT-PCR检测p27mRNA的表达变化。流式细胞检测发现，，与对照组和空载体组相比，转染mp66shcA后，处于G0／G1期的PC12细胞百分比明显升高（P＜0.01），而G2／M期的细胞百分比明显降低（P＜0.01）；在mRNA水平上，转染mp6shcA的p27的表达明显升高（P＜0.01）。以上结果表明，mp66shcA基因影响神经元前体细胞的增殖。为了确定p66shcA基因在NGF诱导PC12细胞分化过程中是否启促进作用。我们用G418筛选转染后稳定克隆，比较在NGF作用下实验组与对照组分化程度的快慢。由于该基因有诱导凋亡的作用，无法得到稳定克隆，但在NGF诱导两天的条件下，过表达目的基因的PC12细胞，与对照组细胞相比，确有明显分化的细胞形态出现，并且通过流式细胞仪检测，发现过表达p66shcA的PC12细胞在G0／G1期的百分比要明显高其它两组，相反S期细胞百分比明显低于其它两组，初步推测该基因有促进神经细胞分化的作用。