牛骨形态发生蛋白受体IB基因（BMPR-IB）cDNA的克隆及序列分析

论文摘要

本研究从影响牛的繁殖性能的BMPR-IB基因出发,利用Genbank中其它物种的序列信息,通过序列比对、分析和RT-PCR方法,对尚未报道的牛BMPR-IB基因序列进行扩增、克隆测序、及序列分析。方法:1、在Genbank中查找人、小鼠和羊的BMPR-IB基因序列,运用DNAStar软件对这些序列进行同源性分析。依据同源性较高区域设计引物。首先提取牛卵巢组织中的总RNA,采用RT-PCR技术扩增牛BMPR-IB的部分cDNA序列,将此片段重组到PMD18-T载体中,双酶切和PCR鉴定后测序,获得长为953bp的牛BMPR-IB部分cDNA序列,克隆片段编码297个氨基酸。2、克隆后序列与Genbank公布其它物种包括绵羊、山羊、人、猴子、黑猩猩、家鼠、挪威鼠、猪、袋鼠、狗和鸡的核苷酸序列同源比对,发现它们的同源性分别为98%、97.6%、91.9%、91.7%、92.1%、87.9%、87.3%、92.9%、86.8%、91.6%、83.9%,证实克隆的序列为牛BMPR-IB序列,为克隆其它BMP家族成员提供了依据。3、进行了氨基酸序列基本性质进行了分析,并发现牛的氨基酸序列与上述11种动物的氨基酸同源性都在98%以上,并且进一步对蛋白质二级结构进行了预测,为我们更好的理解牛的生殖机理提供帮助。此序列已登陆Genbank,登陆号:DQ489533。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 骨形成蛋白（BMP）的研究进展
• 1.1.1 BMP 发现简史
• 1.1.2 BMP 的结构
• 1.1.3 BMP 基因的克隆
• 1.1.4 BMP 的染色体定位
• 1.1.5 BMP 的生物学功能
• 1.2 BMP 受体的研究进展
• 1.2.1 BMP 受体分类
• 1.2.2 BMP 受体在卵巢的表达
• 1.2.3 BMP 受体信号传导机制
• 1.3 BMPR-IB 基因的研究进展
• 1.3.1 BMPR-IB 基因的发现
• 1.3.2 BMPR-IB 的三维结构模型
• 1.3.3 BMPR-IB 基因在繁殖中的作用
• 1.4 本实验的目标和意义
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株和克隆载体
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要药品及试剂
• 2.1.4 缓冲液及主要试剂的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 样本的采集
• 2.2.2 RNA 酶的灭活
• 2.2.3 总RNA 的提取
• 2.2.4 电泳检测提取总RNA
• 2.2.5 引物的设计与合成
• 2.2.6 反转录（RT）
• 2.2.7 PCR 的反应
• 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物
• 2.2.9 牛BMPR-IB 基因cDNA 的克隆及重组质粒的筛选和鉴定
• 2.2.10 DNA 序列测定分析
• 3 结果分析
• 3.1 总 RNA 提取结果与分析
• 3.2 RT-PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳检测结果
• 3.3 目的片断的回收
• 3.4 菌液PCR 鉴定
• 3.5 重组质粒酶切的鉴定
• 3.6 测序结果
• 3.7 牛BMPR-IB 基因cDNA 序列分析
• 3.7.1 牛BMPR-IB 基因的分子质量、碱基组成、碱基分布
• 3.7.2 牛BMPR-IB 的cDNA 序列与其它动物 BMPR-IB cDNA 的比较
• 3.7.3 不同种生物BMPR-IB 基因核苷酸序列的同源性分析与进化分析
• 3.8 牛BMPR-IB 蛋白质序列的基本分析
• 3.8.1 牛BMPR-IB 基因分子质量、氨基酸组成、半胱氨酸的间隔分析
• 3.8.2 牛BMPR-IB 蛋白疏水性和跨膜区分析
• 3.9 牛BMPR-IB 蛋白质二级结构的预测
• 3.10 不同种生物蛋白质序列同源性分析与进化分析
• 4 讨论
• 4.1 BMPR-IB cDNA 核苷酸序列及同源性比较
• 4.2 牛BMPR-IB 蛋白质序列的基本性质分析
• 4.2.1 牛BMPR-IB 蛋白基因分子质量和氨基酸组成分析
• 4.2.2 牛BMPR-IB 蛋白半胱氨酸距离的分析
• 4.2.3 牛BMPR-IB 蛋白疏水性分析
• 4.2.4 牛BMPR-IB 蛋白横跨膜分析
• 4.3 牛BMPR-IB 蛋白质二级结构的预测
• 4.4 牛BMPR-IB 蛋白的同源性分析
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介