联合应用抗菌药物对兰索拉唑体内外代谢的影响

论文摘要

研究背景:第一代质子泵抑制剂兰索拉唑是强效抑酸剂,通过不可逆抑制胃壁细胞中的H+/K+-ATP酶活性发挥抑制胃酸分泌、增强胃壁细胞防御、促进溃疡愈合的作用。其在体内主要经细胞色素P450酶（cytochrome P450 enzymes,CYP）CYP2C19和CYP3A4代谢为5-羟基兰索拉唑和兰索拉唑砜。由于90%的消化性溃疡伴随幽门螺杆菌感染（Helicobacter pylori,Hp）,同时Hp也是诱导消化性溃疡及慢性胃炎的主要病理因素之一,因此兰索拉唑联合应用抗菌药物以治疗消化性溃疡显得极为重要。克拉霉素、阿莫西林、甲硝唑、呋喃唑酮是在临床实践过程中常用的抗Hp感染并对其效果显著的抗生素。兰索拉唑与其中一种或多种联用在治疗胃消化性溃疡方面治愈率高、复发率低,然而,有关上述抗菌药物对兰索拉唑,尤其是对其代谢产物5-羟基兰索拉唑及兰索拉唑砜代谢的研究国内外未见报道。目的:考察抗菌药物阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮分别与兰索拉唑联合应用后,对兰索拉唑及其代谢产物5-羟基兰索拉唑及兰索拉唑砜药代动力学的影响,并进一步评价其对CYP的作用机制。方法:1.建立HPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中兰索拉唑及其代谢产物5-羟基兰索拉唑、兰索拉唑砜的浓度:使用Diamonsil C18柱（150×2.1mm,5μm）;流动相:乙腈-水(含0.01%甲酸及2mmol·L-1的醋酸铵（43:57,V/V）;流速:0.3ml·min-1;柱温:40℃;进样量10μL。质谱条件电喷雾离子源（ESI-）,以多反应监测离子方式测定兰索拉唑及其代谢产物,选择性监测质荷比（m/z）为368.0 / 163.9（兰索拉唑）,384.1/179.9（5-羟基兰索拉唑）,383.9 / 115.9（兰索拉唑砜）,326.0 / 280.1（内标奥美拉唑）。2.将42只SD雄性大鼠随机分为7组,每组6只,第一组为生理盐水组,第二至七组分别为酮康唑组、反苯环丙胺组、甲硝唑组、克拉霉素组、阿莫西林组、呋喃唑酮组,除第一组给予等体积生理盐水外,其余组给予相应药物,剂量分别为酮康唑(5mg·kg-1)、反苯环丙胺(5mg·kg-1)、甲硝唑(200mg·kg-1)、克拉霉素(50mg·kg-1)、阿莫西林(100mg·kg-1)、呋喃唑酮(40mg·kg-1)。各药物灌胃给药15min后,十二指肠给予兰索拉唑(8 mg·kg-1),于不同时间点采集血样,HPLC-MS/MS测定兰索拉唑及其代谢产物的血药浓度,分析大鼠体内药动学参数。3.建立肝微粒体孵育体系中5-羟基兰索拉唑及兰索拉唑砜的定量方法。4.优化大鼠肝微粒体孵育条件,以优化的孵育条件考察抗菌药物对兰索拉唑两种代谢途径的抑制强度及抑制机制:以抗菌药物组与空白对照组代谢产物的百分率-Log（抗菌药物浓度）拟合曲线求得IC50值,以Lineweaver-Burk双倒数作图考察药物的抑制机制。结果:1.大鼠血浆兰索拉唑、5-羟基兰索拉唑、兰索拉唑砜的线性范围分别为11.44560,1.26504,1.24496 ng.mL-1;定量下限分别为11.4,1.26,1.24 ng.mL-1;批内、批间精密度RSD值均小于15%。2.克拉霉素、呋喃唑酮与兰索拉唑(8mg·kg-1)联合应用后,兰索拉唑在大鼠体内的AUC0-4h从（487.34±290.80） ng/L·h分别增加至（854.85±295.18） ng/L·h （P<0.05）和（779.82±310.2） ng/L·h。克拉霉素、呋喃唑酮均显著降低兰索拉唑砜与兰索拉唑AUC0-4h的比值（P<0.05）,但对5-羟基兰索拉唑无显著影响。甲硝唑使兰索拉唑的AUC0-4h降低为阴性对照组的（0.20±0.06）（P<0.05）,且显著增加5-羟基兰索拉唑与兰索拉唑AUC0-4h的比值,（（0.24±0.08）VS（0.39±0.19））（P<0.05）。阿莫西林对兰索拉唑及其代谢产物的药代动力学参数均无显著影响。3.体外孵育测定结果:5-羟基兰索拉唑、兰索拉唑砜分别在5.572520 ng·mL-1、5.422480 ng?mL-1范围内线性关系良好。定量下限分别为5.57,5.42 ng.mL-1;批内、批间精密度RSD值均符合要求。4.体外实验结果发现克拉霉素对CYP3A4的抑制常数IC50为66μM,呋喃唑酮对CYP2C19及CYP3A4的抑制常数IC50分别为46μM和55μM。克拉霉素对CYP3A4代谢的抑制属于非竞争-反竞争型抑制,呋喃唑酮对CYP2C19代谢的抑制属于竞争-非竞争型抑制,对CYP3A4代谢的抑制属于非竞争-反竞争型抑制。甲硝唑对CYP2C19及CYP3A4均无显著抑制或诱导作用。结论:克拉霉素和呋喃唑酮主要对兰索拉唑经CYP3A4主导的磺化代谢途径产生抑制作用,通过抑制兰索拉唑的清除来影响兰索拉唑的生物利用度继而影响其体内作用。甲硝唑对大鼠体内CYP3A4主导的磺化代谢抑制作用不明显,但是可以降低兰索拉唑在大鼠体内的AUC。阿莫西林的联合应用对兰索拉唑的体内过程无明显影响。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 第一章 抗菌药物联合应用对大鼠体内兰索拉唑代谢影响的研究
• 引言
• 第一节 HPLC/MS/MS 法检测大鼠血浆中兰索拉唑、兰索拉唑砜及 5-羟基兰索拉唑的浓度
• 1 材料与仪器
• 2 方法与结果
• 3 讨论
• 第二节 联合应用抗菌药物对大鼠体内兰索拉唑代谢的影响
• 1 材料与仪器
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 本章小结
• 第二章 抗菌药物联合应用对兰索拉唑代谢的体外研究
• 前言
• 第一节 HPLC-MS/MS 法检测大鼠肝微粒体酶孵育体系中代谢产物方法的建立
• 1 材料与仪器
• 2 方法及结果
• 3 讨论
• 第二节 联合应用抗菌药物对兰索拉唑经肝微粒体酶代谢作用强度及机制的研究
• 1 材料与仪器
• 2 方法及结果
• 3 讨论
• 本章小结
• 总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢