端粒酶检测在银屑病中的意义及喜树碱和喜树异碱抗银屑病作用的研究

论文摘要

目的:端粒酶是一种核糖核蛋白复合物,能以自身RNA 成分为模板催化染色体末端端粒重复序列的延伸,使细胞得以持续增殖甚至永生化。绝大多数恶性肿瘤和某些炎性增生性疾病包括银屑病伴有端粒酶活性的增高。银屑病是一种T 细胞介导的免疫性疾病,存在角质形成细胞的增殖和凋亡异常。端粒酶活性与银屑病角质形成细胞的增殖和凋亡及T 细胞的活化密切相关,本研究将喜树碱和一种新的喜树碱类化合物喜树异碱作用于人永生化表皮细胞和人脐静脉血管内皮细胞,观察两种药物对细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响,以探讨喜树碱类药物抗银屑病作用的可能机制;同时观察寻常型银屑病患者外周血单个核细胞的端粒酶活性及与疾病严重程度的相关性,以探讨端粒酶活性检测在银屑病中的作用。方法:将不同浓度的喜树碱和喜树异碱分别作用于体外培养的HaCaT 细胞和ECV304 细胞,用MTT 法检测两种药物对HaCaT 细胞增殖的抑制作用及有效浓度范围;倒置显微镜和透射电镜观察细胞处理后的形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附（TRAP-ELISA）法检测细胞的端粒酶活性。密度梯度离心法分离19 名寻常型银屑病患者和13 名正常人的外周血单个核细胞,TRAP-ELISA 法检测细胞端粒酶活性,并分析其与银屑病疾病严重程度和病程的相关性。结果:（1）喜树碱和喜树异碱均可抑制HaCaT 细胞增殖,作用24h、48h、72h 的IC50 分别为1.893μg/ml、1.029μg/ml、0.332μg/ml和81.69μg/ml、74.63μg/ml、66.56μg/ml。两种药物对HaCaT 细胞的抑制作用在一定浓度范围内均呈明显的时间和浓度依赖性。光镜和电镜下可见细胞经药物作用后生长受到抑制,表现出典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测发现药物可将HaCaT 细胞阻滞于S 期,并以浓度依赖性的方式诱导细胞凋亡,且在可诱导凋亡（1 和2μg/ml;70 和85μg/ml）和低于诱导凋亡的浓度（0.5μg/ml;55μg/ml）下抑制HaCaT 细胞的端粒酶活性,随浓度增加抑制作用增强。（2）喜树碱在诱导凋亡（0.125 和0.5μg/ml）和低于诱导凋亡的浓度（0.063μg/ml）下均可抑制血管内皮细胞的端粒酶活性,且随浓度增加抑制作用增强。喜树异碱对ECV304细胞的端粒酶活性也有抑制作用。（3）银屑病患者的外周血单个核细胞端粒酶活性较正常对照明显增高（P<0.001）,进行期（0.97±0.19）高于静止期（0.90±0.17）,但两者间无显著性差异;端粒酶活性与疾病严重程度成正相关（r=0.889, P<0.001）,而与病程无关。结论:喜树碱和喜树异碱均可以浓度依赖性的方式抑制角质形成细胞增殖、诱导凋亡,两种药物对角质形成细胞和血管内皮细胞的端粒酶活性均有抑制作用,且浓度低于诱导凋亡的浓度,提示端粒酶活性下调可能先于细胞凋亡而发生,由此证明喜树碱抗银屑病的作用机制一方面可能与抑制端粒酶活性从而抑制角质形成细胞增殖、诱导凋亡有关,另一方面可能以同样的作用抑制血管生成而达到治疗银屑病的目的。新的喜树碱类化合物喜树异碱亦可能具有同样的作用。银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性较正常对照显著增高,可能与淋巴细胞的增殖活化有关,端粒酶活性水平与疾病严重程度成正相关,可作为银屑病活动和病情严重程度的一个敏感指标。

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 第一部分:喜树碱及喜树异碱抑制HaCaT 细胞增殖、诱导凋亡及对端粒酶活性的影响
• （四） 第二部分:喜树碱及喜树异碱对血管内皮细胞端粒酶活性的影响
• （五） 第三部分:银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性及与疾病严重程度的关系
• （六） 结论
• （七） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢