氯氮平分散片体内药物分析方法及健康人体药代动力学研究

论文摘要

目的:建立采用高效液相色谱-质谱连用仪测定人血浆中氯氮平浓度的方法,进行受试制剂氯氮平分散片与市售参比制剂氯氮平片的单剂口服双交叉两周期人体生物等效性试验,评价其生物等效性,为新药报批及其临床应用提供试验依据。方法:采用HPLC-MS法测定氯氮平血浆药物浓度。色谱条件:Diamonsil C18色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）;流动相为甲醇-0.005mol·L-1乙酸铵溶液（80:20）;流速0.8mL·min-1;柱温25℃;进样量5μL。质谱条件:AP-ESI离子源,正离子模式,干燥气（N2）流速11.0L·min-1,干燥气压力50psig,干燥气温度为350℃,毛细管电压4000V,选择性监测质荷比（M/Z）为327.2（氯氮平）和266.1（内标米氮平）的离子峰,碎片电压分别为130V和120V。试验采用两周期交叉试验设计。健康志愿者20名,男性,按体重配对后随机分为两组,分服受试制剂氯氮平分散片或参比制剂氯氮平片,于药前和药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、8、12、24、36、48h取肘静脉血4mL,立即移入肝素抗凝管中,静置,5000rpm离心5min,取血浆分双份于-20℃贮存备测。一周后重复上述试验。采用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）法测定氯氮平经时血药浓度。氯氮平血药浓度-时间数据经DAS 2.0实用药代动力学计算程序处理,得受试制剂和参比制剂氯氮平药代动力学参数,并根据受试制剂和参比制剂氯氮平AUC0-48计算受试制剂的相对生物利用度。同时对主要药代动力学参数进行方差分析、双单侧t检验和（1-2α）置信区间分析,评价受试制剂和参比制剂的生物等效性。结果:该测定方法定量下限为2ng·mL-1;氯氮平在2～400ng·mL-1。浓度范围内线性关系良好（r=0.9988）,绝对回收率试验结果表明氯氮平血浆样品浓度为5、50、350ng·mL-1和米氮平浓度为50ng·mL-1,平均回收率分别为70.12%、64.32%、70.50%和64.12%;相对回收率试验结果表明氯氮平血浆样品浓度为5、50、350ng·mL-1的回收率分别为100.71%、97.10%、98.82%;日内、日间变异均小于10%;样品在-20℃放置14天、经历二次冷冻-解冻循环稳定;质控样本相对偏差均在±10%范围内。受试制剂氯氮平分散片和参比制剂氯氮平片主要药代动力学参数t1/2分别为（14.019±4.012）h和（14.562±3.746）h,Tmax分别为（2.425±0.832）h和（2.300±0.470）h,Cmax分别为（138.183±52.958）ng·mL-1和（138.880±46.467）ng·mL-1,AUC0-48分别为（1822.893±580.029）ng·mL-1·h和（1848.438±574.998）ng·mL-1·h,AUC0～∞分别为（2031.682±705.293）ng·mL-1·h和（2063.239±668.203）ng·mL-1·h。受试制剂氯氮平分散片相对生物利用度F为99.1%±11.0%。结论:本研究建立的HPLC-MS法测定人血浆中氯氮平浓度的方法经验证,方法灵敏、准确、选择性高、特异性好、操作简便易行,与HPLC法相比具有明显的优势,可作为人血浆中氯氮平浓度的测定方法。多因素方差分析显示,受试制剂氯氮平分散片和参比制剂氯氮平片单剂口服双交叉试验主要药代动力学参数药物间和周期间无显著性差异。进一步双单侧t检验和（1-2α）置信区间分析个体间、周期间和剂型间符合生物等效的假设,即氯氮平分散片与市售参比制剂氯氮平片生物等效。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 HPLC-MS法测定氯氮平血浆浓度的方法学研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 方法与结果
• 2.1 分析方法
• 2.1.1 色谱条件
• 2.1.2 质谱条件
• 2.1.3 样本处理
• 2.1.4 样本测定
• 2.2 方法学研究
• 2.2.1 氯氮平储备液及标准系列溶液配制
• 2.2.2 方法专属性
• 2.2.3 线性关系及范围
• 2.2.4 方法精密度
• 2.2.5 回收率试验
• 2.2.5.1 绝对回收率
• 2.2.5.2 相对回收率
• 2.2.6 定量下限
• 2.2.7 样品稳定性试验
• 2.2.8 质控试验
• 3 讨论
• 第二部分 氯氮平分散片健康人体药代动力学研究
• 1 仪器与材料
• 2 方法与结果
• 2.1 志愿者选择
• 2.1.1 入选标准
• 2.1.2 剔除标准
• 2.1.3 入选志愿者体格检查资料
• 2.2 试验设计
• 2.3 血浆中氯氮平浓度测定
• 2.3.1 各志愿者口服氯氮平分散片和氯氮平片后血药浓度-时间数据
• 2.3.2 20名志愿者口服氯氮平分散片和氯氮平片后血药浓度-时间曲线图
• 2.4 数据处理
• 2.4.1 主要药代动力学参数计算
• 2.4.2 生物等效性评价
• 2.5 不良反应观察结果
• 2.5.1 志愿者服药前后血压、心率观察
• 2.5.2 志愿者主要不良反应
• 3 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录（附全文）
• 学位论文评阅及答辩情况表