论文摘要
研究背景 大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次级代谢产物,类属于黄酮类化合物。金雀异黄素（genistein,Gen）,即5,7,4′-三羟基异黄酮,是大豆异黄酮类化合物的主要成分,具有多种有益于人类身体健康的生理活性,如防癌抗癌,防治骨质疏松症和心血管疾病,治疗妇女更年期综合症等。 近年来离体和在体研究都证实Gen具有明显的抑制肿瘤的作用,并且与诱导肿瘤细胞凋亡有关。Gen可能通过多种途径而诱导肿瘤细胞凋亡。对细胞凋亡加以诱导或抑制,已成为防治肿瘤的一种新策略和研究的热点。 细胞凋亡可能也参与肿瘤的转移过程,在某些肿瘤中发现,抑制凋亡可以促进肿瘤转移,推测细胞凋亡可能降低肿瘤的浸润和转移能力。通过调控肿瘤细胞凋亡,而阻断肿瘤转移是肿瘤治疗的一个方向。 淋巴转移是多数肿瘤最常见扩散途径之一,以往关于药物尤其是Gen抑制肿瘤淋巴转移的报道甚少,而针对同一细胞来源但不同淋巴转移能力的肿瘤细胞的抑制研究更是鲜见报道。 研究目的 本实验选择不同淋巴转移能力的腹水型小鼠肝癌细胞株HepA-H（高淋巴转移肿瘤细胞）和HepA-L（低淋巴转移肿瘤细胞）作为Gen抑制肿瘤的研究对象,研究Gen对HepA-H和HepA-L的抑制作用,探讨Gen抑制肿瘤细胞淋巴转移的作用机理。浙江大学硕士学位论文2005 研究方法（1）盯T法检测Gen在体外抑制HePA一H和HepA一L细胞增殖的作用;（2）扫描电镜、透射电镜观察H即A一和H即A一L细胞形态的改变;（3）琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder;（4）流式细胞术检测HePA一和HepA一L细胞的凋亡;（5）将HeP人一和H即A一L细胞接种NIH小鼠,制备荷瘤动物模型,多en腹腔给药后第14天取淋巴结观察,并计算转移率;（6） TUNEL法检测淋巴结凋亡细胞。 研究结果MTT结果发现Gen对HePA一细胞和HePA一L细胞的增殖均具有良好的抑制作用,且对HepA书细胞的抑制优于HePA一L细胞,并呈时效、量效关系;同时,在Gen最大浓度和最长时间作用点,抑制率达到最大。Gen在体外能诱导HepA一和H即A一L细胞凋亡,在50 mg/L Gen作用48h后,两株细胞均发生收缩,微绒毛显著减少,甚至消失。扫描电镜下可见细胞膜表面有泡状突起,并可见分离出的凋亡小体。透射电镜下可见细胞膜完整,胞浆空泡化,核缩小变形,染色质固缩,常聚集于核膜。不同浓度Gen作用H即A一细胞24h、48h后,在Gen低浓度（20mg/L）时DNA电泳无梯状条带出现;中浓度（50mg/L）可见典型梯状条带出现;高浓度（IOOmg/L）在24h只出现梯状条带,在48h同时存在DNA ladder和涂抹状;但HepA一L细胞只在高浓度（100mg/L）作用48h,才有DNA ladder出现。HePA一细胞和HePA一L细胞凋亡率与Gen呈量效、时效关系（只0.01）,且HepA一细胞的凋亡率明显高于HepA一L细胞（代0.01）,100mg/LGen作用48h后,HepA一的凋亡率达到7.19%,而He冰一L的凋亡率仅为1.86%,但细胞周期改变均不明显。在荷瘤动物实验中,Gen能明显抑制肿瘤生长和肿瘤淋巴转移,抑制作用呈量效、时效关系,且对HePA一细胞的抑制强于HepA一L细胞。在H即A讯给药的第14天,对照组和每日剂量为200mg/L的实验组的肿瘤体积分别为394.63士89.77砚3和122.53士22.73mms,淋巴结转移率分别为91.67%和25.0叽;在H即A一L的实验中,对照组和每日剂量为200mg/L的实验组的肿瘤体积分别为188.43士68.74nnns和73.72士49.18nuns,淋巴结转移率分别为25.00%和8.33%。TUNEL法也检测到Zoomg/L的HepA书实验组的凋亡指数为3.87%,显著高于HepA一L实验组的1.69%,表明HepA一细胞对Gen诱导的淋巴结内肿瘤细胞的凋亡作用更敏感。 研究结论（1） Gen是一种有效的抗肿瘤药物,在体内外均能抑制HepA一H细胞和HePA一L细胞增殖并诱导凋亡。