酶联免疫斑点法在活动性结核病和结核潜伏感染中的诊断价值

论文摘要

实验背景:目前仍然没有诊断活动性结核病和结核潜伏感染的可靠方法。结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test,TST）是目前检测结核分枝杆菌感染的细胞免疫功能的常规方法,但其所应用的抗原—纯化蛋白衍生物（purified protein derivative of tuberculin ,PPD）,是结核分枝杆菌培养上清液的粗提物,含有200多种成分,与BCG接种和环境分枝杆菌感染存在交叉反应,导致TST诊断的准确性较低,因此我们无法根据其结果判断是否真正存在结核分枝杆菌感染。结核分枝杆菌RD1区域编码的早期分泌抗原靶（early secreting antigen target 6KD ,ESAT-6）和培养滤液蛋白（culture filtrate protein 10KD ,CFP10）存在于结核分枝杆菌复合群中,但在BCG和大部分环境分枝杆菌中缺失,是结核分枝杆菌特异性抗原。酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunospot assay ,ELISPOT）是近年来兴起的检测细胞免疫功能的一种方法,其检测经抗原刺激后分泌细胞因子的效应T淋巴细胞的数量,此方法灵敏稳定,已被越来越广泛的应用于包括结核、肿瘤、HIV感染、肝病等各领域的研究当中。Lalvanai A等于2001年首先应用此方法进行活动性结核病和LTBI的诊断,证明其具有较高的敏感性和特异性。本实验应用结核特异性抗原进行ELISPOT检测抗原特异性IFN-γ分泌T淋巴细胞,探讨其在活动性结核病和LTBI诊断中的价值。实验方法本研究选取研究对象总数286例,其中菌阳肺结核55例、菌阴肺结核50例、结核性胸膜炎27例、TST（-）非结核疾病对照46例、TST（-）健康对照25例、TST（+）健康对照19例,有结核暴露史的健康者55例,有结核既往治疗史者9例。对所有研究对象提取外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）进行细胞培养,应用PPD、ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合蛋白进行ELISPOT,检测经抗原刺激后分泌IFN-γ的效应T淋巴细胞（即斑点形成细胞,SFC）的数量,并对有结核暴露史的健康者同时行TST。实验结果PPD-ELISPOT、ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT、ESAT-6-ELISPOT形成的SFC数量显著高于对照组形成的SFC数量; ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT诊断活动性结核的敏感性（90.3%）和特异性（84.4%）较高,而PPD-ELISPOT特异性可能受BCG接种的影响而使其诊断特异性降低（68.9%）;各抗原ELISPOT在活动性结核组间形成的SFC数量和敏感性无明显差异,ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT形成SFC数量与治疗时间相关。ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT、ESAT-6-ELISPOT在结核组形成SFC数量显著高于在LTBI形成的SFC数量,而ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT和ESAT-6-ELISPOT在LTBI形成的SFC数量显著高于健康对照形成SFC的数量。在有结核暴露史的健康组中,ESAT-6/CFP-10-ELISPOT与结核暴露史相关,与BCG接种无关;TST主要受BCG接种的影响。实验结论ESAT6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT是诊断活动性结核病较准确的一种方法,尤其是为菌阴肺结核和结核性胸膜炎的诊断提供一定的依据,并且可以监测疗效;可以用于LTBI的诊断,并可根据SFC的数量来鉴别LTBI和活动性结核病;ESAT6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT与BCG接种无关,而TST主要受BCG接种的影响。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文 酶联免疫斑点法在活动性结核病和结核潜伏感染中的诊断价值
• 前言
• 实验对象
• 实验试剂和仪器
• 实验方法
• 统计学处理
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 小结
• 参考文献
• 综述 酶联免疫斑点技术及其在结核诊断中的研究进展
• 正文
• 参考文献
• 致谢