视网膜色素变性患者RP1基因突变特征及其表型的研究

论文摘要

目的视网膜色素变性（RP）是一组最常见的视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致夜盲和进行性视野缺损的遗传性、致盲眼底病。目前已经发现有19个基因的150多个突变位点与其有关,其中RP1基因突变占第二位。本研究目的是观察常染色体显性遗传视网膜色素变性（ADRP）患者和散发视网膜色素变性（SRP）患者RP1基因突变特征及其与临床表型之间的关系,并探讨它们在RP发病机制中的作用。方法按国际通用的ADRP诊断标准对所收集到常染色体显性遗传视网膜色素变性13个家系中的93例成员及散发患者30例,抽取外周静脉血,提取白细胞DNA,按照已发表的RP1基因序列资料（GenBank识别号为AF143222）,运用primer 5.0软件进行引物设计。设计区域均覆盖了RP1基因外显子及附近拼接位点中的内含子,共设计合成了6对引物。聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增RP1基因第2～4外显子基因片段,将所有的PCR产物进行DNA测序及序列分析,并收集118例正常人进行对照检测。运用单因素分析、多因素Logistic回归分析研究RP1突变位点对RP的作用及与临床表型之间的关系。结果RP1基因上共检测出9个变异位点,其中7个为新发现的变异位点。在RP1基因的第二外显子检测出3个突变位点,在第四外显子检测出6个变异位点,突变类型均为点突变,包括3个沉默突变T166T、E921E和K852K;6个错义突变:A985T、F63I、G79E、R872H、P903L、和R939K。1个ADRP家系（ZMY家系）的8例RP患者在RP1基因第四外显子第985密码子发生A→T碱基置换,这一改变导致所编码的天酰氨酸（Asn）变为酪氨酸（Tyr）。A985T改变与RP疾病出现“共分离”现象。该家系RP患者临床表现的主要特点为:夜盲与视功能损坏从40岁以后出现,到60岁以后仍可保存较好的中心视力。在ADRP家系和散发的RP患者中检出的R872H位点、F63I位点和G79E的错义突变与RP之间存在显著相关性。RP1基因第四外显子P903L位点的改变仅在家系成员中检出,散发病例及对照组均未检测出。结论RP1基因的Asn- 985- Tyr突变与RP疾病出现“共分离”现象,因此该错义突变是导致该家系发生迟发性视网膜色素变性的可能致病原因。RP1基因R872H位点、F63I和G79E位点多态性可增高RP的危险性,具有潜在的致病性,考虑为家系和散发RP患者的易感基因。P903L位点改变是否为致病基因有待于进一步证实。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 一、正文
• 前言
• 材料与方法
• 1. 研究对象
• 2. 临床研究方法
• 3. 分子遗传学研究
• 4. 统计学分析
• 5. 几种主要试剂的配制
• 6. 相关检索网站
• 结果
• 1. PCR 反应变量的优化
• 2. 样品DNA 质量检测及PCR 扩增片段鉴定
• 3. DNA 直接测序结果
• 4. ZMY 家系分析
• 5. 统计学分析结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 二、文献综述
• 1. 综述
• 2. 综述参考文献
• 三、致谢
• 四、攻读学位期间发表的学术论文
• 五、个人简历