姬松茸多糖的制备及其抗氧化、保肝作用研究

论文摘要

姬松茸（Agaricus blazei Murill）是一种珍贵的食药兼用的真菌,因其味道鲜美、药用价值高,深受人们的喜爱。姬松茸具有增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等多种生理活性,其多糖含量居食用蕈菌之首,在医药领域和保健品行业中具有很高的开发应用前景。但是国内外对姬松茸多糖抗氧化、保肝作用研究较少,本文以姬松茸为原料,超滤制备得到姬松茸级分多糖,并研究了姬松茸活性多糖的抗氧化作用及其对D-半乳糖胺（GalN）诱导小鼠肝损伤的保护作用,结果如下：1、在单因素试验的基础上,经中心组合试验和响应面分析（RSA）,得到姬松茸多糖提取的最佳工艺条件为：提取温度100℃,提取时间3.36h,料液比1：20。该条件下多糖得率预测值为8.727%,验证值为8.718%。2、采用木瓜蛋白酶-Sevag联合法脱去姬松茸多糖中的蛋白,这种脱蛋白方法不仅效果好,且多糖损失率小,明显优于单独使用Sevag法。通过研究姬松茸多糖的超滤分级,确定了其工艺条件为：多糖浓度控制在30mg/mL（100kDa膜）、25mg/mL（10kDa膜）以下,超滤温度20℃-30℃,pH7-8,压力0.08MPa左右。按分子量大小可将姬松茸多糖分级为3个级分：ABMP1 （>100kDa）、ABMP2 （10kDa-100kDa）和ABMP3（<10kDa）,其比例大约为2.36：1.17：1,总回收率为79.16%。3、姬松茸多糖都是中性糖,不含糖醛酸。ABMP1、ABMP2、ABMP3都是不含多酚的非淀粉多糖。采用气相色谱法分析姬松茸级分多糖的单糖组成,发现ABMP1、ABMP3主要由葡萄糖构成;ABMP2由岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,其摩尔比为1：1.02：6.69：4.40。4、姬松茸多糖具有较明显的抗氧化活性。比较研究姬松茸级分多糖ABMP1、ABMP2和ABMP3的抗氧化活性强弱,发现分子量为10kDa-100kDa的姬松茸级分多糖ABMP2抗氧化活性最强,因此选取ABMP2进行后续的保肝作用研究。5、研究了姬松茸粗多糖ABMP和姬松茸级分多糖ABMP2对GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用。在与模型组对比的情况下,ABMP、ABMP2各剂量组均能降低实验小鼠的肝脏指数和脾脏指数,降低实验小鼠AST、ALT和肝组织中MDA含量,同时提高实验小鼠肝中GSH含量；病理切片图也表明ABMP、ABMP2各剂量组能够不同程度地减轻实验小鼠肝细胞的损伤程度,且ABMP2的保肝作用要优于ABMP,高剂量ABMP2对GalN诱导的小鼠肝损伤保肝作用最好。其保肝作用机制有待进一步的研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 第一章 综述
• 1 真菌多糖生物活性研究进展
• 2 姬松茸多糖研究进展
• 2.1 姬松茸多糖的提取研究
• 2.2 姬松茸多糖的生物活性研究进展
• 3 研究背景及主要研究内容
• 3.1 论文研究背景及目的意义
• 3.2 论文的主要研究内容
• 4 本研究创新点
• 第二章 姬松茸多糖最佳提取工艺的研究
• 引言
• 1 材料
• 1.1 主要材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 方法
• 2.1 姬松茸基本成分测定
• 2.1.1 水分含量的测定
• 2.1.2 总糖、还原糖含量的测定
• 2.1.3 蛋白质的测定
• 2.1.4 脂肪含量的测定
• 2.1.5 灰分含量的测定
• 2.2 姬松茸多糖测定方法
• 2.3 多糖得率的计算
• 2.4 姬松茸多糖最佳提取工艺的研究
• 2.4.1 工艺流程
• 2.4.2 提取单因素试验
• 2.4.3 响应面优化中心组合实验
• 2.4.4 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 姬松茸基本成分
• 3.2 单因素试验结果
• 3.2.1 提取温度对姬松茸多糖得率的影响
• 3.2.2 提取时间对姬松茸多糖得率的影响
• 3.2.3 料液比对姬松茸多糖得率的影响
• 3.2.4 提取次数对姬松茸多糖得率的影响
• 3.4 响应面优化中心组合试验结果
• 4 本章小结
• 第三章 姬松茸多糖的超滤分级及理化性质研究
• 引言
• 1 材料
• 1.1 主要材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 实验方法
• 2.1 工艺流程
• 2.2 超滤前处理（脱蛋白方法研究）
• 2.2.1 Sevag法脱蛋白
• 2.2.2 酶法结合Sevag法脱蛋白
• 2.3 姬松茸粗多糖（ABMP）脱蛋白前后抗氧化活性比较
• 2.3.1 还原能力的测定
• 2.3.2 清除羟自由基能力的测定
• 2.3.3 清除超氧阴离子能力的测定
• 2.4 超滤工艺条件的研究
• 2.5 超滤分级ABMP
• 2.6 级分多糖理化性质分析与初步结构鉴定
• 2.6.1 级分多糖的成分测定
• 2.6.2 级分多糖的理化性质
• 2.6.3 紫外光谱分析
• 2.6.4 红外光谱分析
• 2.6.5 气相色谱分析
• 3 结果与分析
• 3.1 超滤前处理（脱蛋白方法研究）
• 3.1.1 不同方法脱蛋白效果比较
• 3.1.2 脱蛋白前后ABMP抗氧化活性比较
• 3.2 超滤工艺条件的确定及超滤结果
• 3.2.1 浓度对超滤效果的影响
• 3.2.2 温度对超滤效果的影响
• 3.2.3 pH对超滤效果的影响
• 3.2.4 压力对超滤效果的影响
• 3.2.5 姬松茸多糖超滤分级结果
• 3.3 级分多糖成分分析
• 3.4 级分多糖理化性质分析
• 3.5 级分多糖的紫外图谱
• 3.6 级分多糖的红外图谱
• 3.7 级分多糖的单糖组成分析
• 4 本章小结
• 第四章 姬松茸多糖抗氧化作用研究
• 引言
• 1 材料
• 1.1 主要原料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 实验方法
• 2.1 还原能力的测定
• 2.2 清除羟自由基能力的测定
• 2.3 清除超氧阴离子能力的测定
• 2O₂诱导大鼠红细胞氧化溶血的影响'>2.4 对H₂O₂诱导大鼠红细胞氧化溶血的影响
• 2.5 对大鼠肝匀浆体外生成MDA的影响
• 2.5.1 对非诱导体系大鼠肝匀浆MDA生成的影响
• 2.5.2 对诱导体系大鼠肝匀浆MDA生成的影响
• 2.6 对大鼠肝线粒体脂质过氧化的影响
• 2.6.1 线粒体悬浮液的制备
• 2.6.2 对大鼠肝线粒体肿胀度的影响
• 2.6.3 对大鼠肝线粒体MDA生成的影响
• 3 结果与讨论
• 3.1 姬松茸粗多糖和级分多糖的还原能力
• 3.2 姬松茸粗多糖和级分多糖对羟自由基的抑制作用
• 3.3 姬松茸粗多糖和级分多糖对超氧阴离子的抑制作用
• 2O₂诱导大鼠红细胞氧化溶血的影响'>3.4 姬松茸粗多糖和级分多糖对H₂O₂诱导大鼠红细胞氧化溶血的影响
• 3.5 姬松茸粗多糖和级分多糖对大鼠肝匀浆体外生成MDA的影响
• 3.5.1 姬松茸粗多糖和级分多糖对非诱导体系大鼠肝匀浆MDA生成的影响
• 3.5.2 姬松茸粗多糖和级分多糖对诱导体系大鼠肝匀浆MDA生成的影响
• 3.6 姬松茸粗多糖和级分多糖对大鼠肝线粒体脂质过氧化的影响
• 3.6.1 姬松茸粗多糖和级分多糖对肝线位体肿胀度的影响
• 2+-Vc诱导肝线粒体MDA生成的影响'>3.6.2 姬松茸多糖和级分多糖对Fe²⁺-Vc诱导肝线粒体MDA生成的影响
• 4 本章小结
• 第五章 ABMP和ABMP2对D-半乳糖胺诱导小鼠肝损伤的保护作用研究
• 引言
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 实验方法
• 2.1 GalN诱导小鼠肝损伤模型的建立
• 2.2 对实验小鼠脏器指数的影响
• 2.3 对实验小鼠血清AST、ALT水平的影响
• 2.4 对实验小鼠肝组织MDA、GSH含量的影响
• 2.4.1 肝组织匀浆的制备
• 2.4.2 肝组织中MDA和GSH的测定
• 2.5 肝组织病理学检查
• 2.6 统计学分析
• 3 结果与分析
• 3.1 姬松茸多糖对GalN所致肝损伤小鼠脏器指数的影响
• 3.2 姬松茸多糖对GalN所致肝损伤小鼠血清中AST、ALT水平的影响
• 3.3 姬松茸多糖对GalN所致肝损伤小鼠肝组织中MDA、GSH水平的影响
• 3.4 实验小鼠肝组织病理学检查
• 4 本章小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录