兔脑缺血再灌注后细胞凋亡机制的研究

论文摘要

目的分析兔脑组织急性缺血及缺血再灌注后细胞凋亡的动态变化,及其与存活素（Survivin）基因和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的关系,探讨兔脑缺血再灌注后细胞凋亡的机制。方法将58只成功的大脑中动脉缺血再灌注新西兰兔模型随机分为永久缺血组（A组）和再灌注组（B组）。其中A组（A1-A6）分为缺血1h、3h、6h、12h、24h、48h组,每组5只;B组（B1-B6）缺血1h拔线再通后分为再灌注0h（5只）、2h（5只）、5h（5只）、11h（4只）、23h（5只）和47h（4只）组。另取10只作假手术组,分别作为A、B组的对照组。每组分别于各时间点进行MRI弥散成像,之后立即断头取脑,分别行HE染色、细胞凋亡、Survivin及nNOS检测,显微镜下观察缺血组织的形态改变,记录细胞凋亡、Survivin及nNOS阳性细胞数。结果缺血后永久缺血组与再灌注组凋亡细胞均呈先上升后下降的趋势,且再灌注组各时间点幅度较永久缺血组低,两组分别于12h及23h达高峰,而后逐渐下降。再灌注组Survivin各时间点阳性细胞数均高于永久缺血组,高峰出现于缺血12h（再灌11h）,永久缺血组凋亡与Survivin基因之间具明显相关性（r=0.963,P=0.002）。再灌组各点nNOS表达均明显高于永久缺血组,总体变化趋势先下降后上升,底峰均位于缺血12h（再灌11h）,再灌注组nNOS与凋亡变化趋势相近,方向相反（r=-0.942,P=0.005）。结论1.脑组织缺血可诱发Survivin基因表达上调,这种改变在一定程度上能够对抗由脑缺血引起的细胞凋亡,从而对脑组织起到保护作用。而在再灌注期nNOS的变化趋势与凋亡变化呈反相关,这提示nNOS的产生可能对濒临凋亡的神经细胞有保护作用。2.缺血6h为临床溶栓治疗的时间窗,在此时间窗内进行再灌流有可能挽救部分半影区组织。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验动物模型建立和分组
• 1.2 脑组织标本采集和处理
• 1.3 HE染色
• 1.4 细胞凋亡检测
• 1.5 Survivin和nNOS免疫组化检测
• 1.6 切片观察
• 1.7 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 组织病理学变化
• 2.2 细胞凋亡变化
• 2.3 Survivin免疫组化检测
• 2.4 nNOS免疫组化检测
• 2.5 相关分析
• 第三章 讨论
• 3.1 脑缺血再灌注后组织病理学和细胞凋亡变化规律
• 3.2 细胞凋亡和存活的调节机制
• 3.2.1 Survivin与细胞凋亡的关系
• 3.2.2 nNOS与细胞凋亡的关系
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢