琐琐葡萄提取物对小鼠巨噬细胞细胞因子及Toll样受体表达的影响

论文摘要

目的:分别利用LPS、Poly（I:C）模拟外源性细菌、病毒感染,探讨琐琐葡萄提取物多糖（VTP）、黄酮（VTF）和水提原液（VTY）对RAW264.7细胞分泌TNF-α,IFN-β的影响及其对细胞表面TLR4、TLR3基因表达的影响。方法:通过对RAW264.7型细胞生物学形态的观察,生长曲线的绘制掌握其一般生物学活性;分别用6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml的VTP、VTF和VTY, 0.01、0.1、1、10μg/ml的LPS,10、25、50、100μg/ml的Poly（I:C）作用于RAW264.7细胞,48 h后采用MTT法测定各组细胞的OD值并计算VTP、VTF和VTY的TC50;采用ELISA法测定LPS和Poly（I:C）最适刺激浓度和VTP、VTF和VTY干预其分泌细胞因子的最适干预浓度;采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLR3、TLR4基因表达情况。结果:（1）琐琐葡萄提取物VTP、VTF和VTY对RAW264.7细胞的TC50分别为599.501、1354.285和1546.094μg/ml;（2） 10μg/ml,24 h作为LPS最适刺激条件诱导炎症;与LPS模型组比较VTF及VTY所有剂量组对TNF-α炎症因子的抑制有统计学差异（ P<0.01）,而VTP（6.25、12.5、50μg/ml）组和25μg/ml剂量组对TNF-α炎症因子的增加有统计学意义（ P<0.01,P<0.05）;（3）以100μg/ml刺激24 h作为Poly（I:C）诱导RAW264.7细胞产生IFN-β的最适条件;与Poly（I:C）模型组相比,VTF（6.25、12.5、25μg/ml）和VTY所有剂量组对IFN-β的抑制均有统计学意义（P<0.01）;而VTP（6.25、12.5、50μg/ml）组对IFN-β的增加有统计学意义（ P<0.01） （4）与细胞对照组比较,不同处理组TLR3和TLR4基因表达的上调均具有统计学意义（P<0.01）;与LPS刺激组相比,VTF干预组的TLR3和TLR4基因表达的下降均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;与Poly（I:C）刺激组比较,VTF对TLR3基因的下调有统计学意义（P<0.01）。结论:VTF在细胞因子水平和基因水平均显示出良好的抗炎、抗毒病效应;VTP可能有激活巨噬细胞的作用,通过促进炎症因子释放而发挥调节机体免疫功能的作用;VTY在体外细胞因子水平有一定的抗炎、抗病毒作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1 实验细胞株
• 1.2 药品
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要工作液配置
• 2. 实验内容与方法
• 2.1 RAW264.7 细胞培养方法
• 2.2 细胞生物学性状研究
• 2.3 细胞毒性实验
• 2.4 抗炎症实验
• 2.5 抗病毒实验
• 3. 质量控制
• 4. 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表