论文摘要
目的：研究抗肿瘤三肽化合物酪丝亮肽（YSL）在肝癌细胞BEL-7402中的定位,并初步探讨小肽转运蛋白（PEPT1）在YSL跨膜转运中的作用。方法：1.建立荧光素5（6）-羧四甲基罗丹明琥珀酰亚氨酯标记YSL的方法,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对荧光标记YSL进行纯化。2.应用毛细管电泳技术和荧光分光光度法对荧光标记YSL进行纯度和稳定性鉴定；应用速率比色法测定人肝癌BEL-7402细胞受损后释放的乳酸脱氢酶来鉴定标记YSL的生物学活性。3.以激光扫描共聚焦显微镜观察标记YSL在体外培养的人肝癌BEL-7402细胞中的分布以及是否与肿瘤细胞的线粒体存在共定位。4.应用荧光偏振法测定YSL体外对人肝癌BEL-7402细胞膜流动性的影响,以流式细胞仪测定YSL体外对人肝癌BEL-7402细胞膜电位的影响,为进一步判定YSL进入肿瘤细胞的方式提供证据。5.应用分光光度法测定YSL对分离的人肝癌BEL-7402细胞线粒体膜电位和线粒体肿胀的影响,观察YSL是否对肿瘤细胞的线粒体有直接作用。6.应用免疫荧光方法,观察小肽转运蛋白PEPT1在人肝癌BEL-7402细胞的定位和表达。7.应用MTS法测定PEPT1的底物GLY-GLN、GLY-SARCOSINE和GLY-GLY-GLY对YSL抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖作用的影响；以倒置荧光显微镜观察三种PEPT1的底物对标记YSL进入BEL-7402细胞数量的影响,探讨YSL进入肿瘤细胞过程是否与PEPT1的功能存在关系。8.应用实时荧光定量PCR法观察YSL对人肝癌细胞BEL-7402中PEPT1的mRNA水平的影响。结果：1.荧光物质5（6）-羧四甲基罗丹明琥珀酰亚氨酯可以稳定地标记YSL。经过20%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后可以得到成分单一的荧光标记YSL。2.合成的荧光标记YSL性质稳定：在-20℃条件下避光保存两周,YSL和5（6）羧四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯结合稳定未发生解离,标记YSL的荧光强度和荧光光谱也未发生明显的变化。并且荧光标记YSL体外损伤人肝癌BEL-7402细胞使之释放的LDH与标记前相比未发生明显的下降（P>0.05）,即标记前后YSL的抗肿瘤生物学活性未发生明显改变。3.荧光标记YSL在体外与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育时能够进入细胞内,并且在细胞中呈聚集分布,与等浓度的5 （6） TAMRA SE在细胞的分布有明显的差别；标记YSL主要分布于BEL-7402细胞的细胞浆中,并且与肿瘤细胞的线粒体呈共定位。4. YSL（1.6mg/ml）在体外作用BEL-7402细胞能够使细胞膜的微黏度增加,降低细胞膜的流动性；还可以降低肿瘤细胞膜的膜电位,造成细胞膜去极化。5.YSL直接作用于体外分离的人肝癌BEL-7402细胞线粒体后,能够降低线粒体膜电位,影响线粒体膜通透性,造成线粒体肿胀。6.在人肝癌BEL-7402细胞中检测到PEPT1蛋白的表达,PEPT1蛋白在BEL-7402细胞主要分布在细胞的胞膜和胞浆。7. PEPT1的作用底物GLY-SARCOSINE、GLY-GLN和GLY-GLY-GLY可以减弱YSL对人肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用,降低标记YSL在体外进入人肝癌BEL-7402细胞的数量。8. YSL （1.6mg/ml）能够在体外上调人肝癌BEL-7402细胞中PEPT1 mRNA水平。结论：应用荧光物质5,6羧四甲基罗丹明琥珀酰亚氨酯可以稳定地标记YSL,并保持YSL原有的抗肿瘤生物活性。YSL可能是跨膜进入到肿瘤细胞的胞质内发挥抗肿瘤作用的,YSL进入肿瘤细胞的过程可能与肿瘤细胞中的小肽转运蛋白PEPT1的转运功能有关。进入肿瘤细胞胞质内的YSL发挥抗肿瘤作用的方式之一可能是通过损伤肿瘤细胞线粒体实现的。
论文目录
相关论文文献
- [1].熊果酸对人肝癌HepG2细胞作用靶点的表观遗传学研究[J]. 人人健康 2015(23)
- [2].超声微泡介导质粒转染对人肝癌HepG2细胞迁移、侵袭及克隆能力的影响[J]. 实用医学杂志 2017(16)
- [3].人肝癌干细胞生物学行为的实验研究[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志 2014(01)
- [4].灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察[J]. 食品科学 2009(09)
- [5].黄荆子乙酸乙酯提取物对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响[J]. 湖南师范大学学报(医学版) 2008(04)
- [6].番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响[J]. 实用肿瘤学杂志 2017(03)
- [7].南蛇藤对人肝癌HepG2细胞侵袭能力的影响[J]. 中药药理与临床 2012(06)
- [8].二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2细胞的诱导分化作用的实验研究[J]. 现代肿瘤医学 2016(16)
- [9].人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用[J]. 中草药 2014(03)
- [10].成人肝癌组织褪黑素受体的表达和结合特性[J]. 中国药理学通报 2010(02)
- [11].水杨酸对人肝癌HepG2细胞体外生长的影响的研究[J]. 肿瘤预防与治疗 2014(03)
- [12].红景天苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡研究[J]. 时珍国医国药 2013(09)
- [13].Phaseoloideside E诱导人肝癌HepG2细胞凋亡[J]. 中国中药杂志 2012(10)
- [14].盐酸氮芥抑制人肝癌HepG2细胞生长的机制探讨[J]. 中南医学科学杂志 2011(05)
- [15].泰素免疫毫微球的制备及其抗人肝癌效果的动物实验研究[J]. 现代消化及介入诊疗 2010(04)
- [16].人肝癌微血管内皮细胞黏附分子表达特点及其对外周血单个核细胞黏附和跨内皮迁移的影响[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2017(10)
- [17].基因芯片分析三肽化合物酪丝亮肽对人肝癌基因表达谱的影响[J]. 天津医科大学学报 2013(05)
- [18].6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长[J]. 中国医药导报 2011(32)
- [19].青蒿琥酯增强顺铂对人肝癌HepG2细胞的细胞毒作用[J]. 热带医学杂志 2015(05)
- [20].甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究[J]. 生物技术通讯 2011(02)
- [21].姜黄素诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及对细胞生长周期的影响[J]. 中国医学工程 2009(04)
- [22].雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响[J]. 安徽医科大学学报 2008(03)
- [23].人肝癌裸鼠皮下移植瘤早期血液供应模式的定量研究[J]. 复旦学报(医学版) 2020(02)
- [24].旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015(04)
- [25].中人氟安对人肝癌裸鼠异位移植瘤生长的抑制作用[J]. 泸州医学院学报 2012(02)
- [26].大蒜素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用研究[J]. 中国科技信息 2012(16)
- [27].人肝癌SMMC-7721细胞培养体会[J]. 中外医疗 2011(02)
- [28].葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡[J]. 暨南大学学报(自然科学与医学版) 2011(02)
- [29].青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应[J]. 中国病理生理杂志 2012(02)
- [30].索拉非尼对人肝癌HepG2细胞株生物学行为的影响及意义[J]. 河北医药 2012(08)
标签：酪丝亮肽论文; 肝癌论文; 荧光标记论文; 激光扫描共聚焦显微镜论文; 线粒体论文; 共定位论文; 膜流动性论文; 小肽转运蛋白论文;