SARS-CoV S蛋白S1区克隆、血清学研究及其单克隆抗体制备

论文摘要

严重急性呼吸综合征（Severe acute respiratory syndrome,SARS）是一种新出现的突发性传染性疾病,其病原体为新型冠状病毒,命名为SARS相关冠状病毒（SARS-associated coronavirus,SARS-CoV）。该病毒有四种结构蛋白,包括spike（S）蛋白、envelope（E）蛋白和membrane（M）蛋白三种膜蛋白和nucleocapsid（N）核心蛋白。S蛋白是病毒颗粒最大的结构蛋白和最重要的病毒表面抗原,已知关于其他冠状病毒和SARS-CoV的研究均表明S蛋白是病毒颗粒与受体结合的媒介分子,也是病毒中和性抗体结合的靶点,在病毒治疗和疫苗研究中起着重要作用。该蛋白属于Ⅰ型膜蛋白,由1255个氨基酸组成,共有24个糖基化位点。根据功能划分,S蛋白可分成两部分:膜外的S1区（形成S蛋白的球形部分）和穿膜的S2区（形成穿膜棒状结构）。在这两个不同的结构域中,S1区结合受体细胞表面,目前已被确认受体结合的功能区是在S蛋白N端318～510 aa之间。 SARS是由一种新出现的冠状病毒引起的,目前对SARS-CoV的致病机理和生物学特征等方面了解甚少。而S蛋白与病毒侵入人体过程关系密切,而且研究证明S蛋白的变异对SARS-CoV病毒株的毒力有很大影响,因此,克隆S蛋白尤其是S1区对SARS-CoV的生物学功能研究、血清流行病学调查以及研制基因工程备选疫苗均具有重要意义。制备抗S蛋白S1区单克隆抗体可能为SARS的特异性治疗提供新的研究材料,同时也可在获得S蛋白单抗的基础上建立SARS-CoV抗原检测方法,为SARS早期诊断提供新方法。 本课题旨在原核克隆表达S蛋白S1区基因及其片段,并在获得的具有免疫原性蛋白的基础上免疫小鼠制备抗S蛋白鼠源性单克隆抗体,建立检测S蛋白

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 S蛋白S1区基因片段的克隆及免疫原性鉴定
• 1.1 引言
• 1.2 材料
• 1.3 方法
• 1.4 结果
• 1.5 讨论
• 第二部分 抗S1蛋白N端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定
• 2.1 引言
• 2.2 材料
• 2.3 方法
• 2.4 结果
• 2.5 讨论
• 第三部分 SARS患者S蛋白S1区的特异性抗体研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料
• 3.3 方法
• 3.4 结果
• 3.5 讨论
• 参考文献
• 附录 1: 缩略词表
• 附录 2: 主要仪器和设备
• 附录 3: 主要溶液的配置
• 学习期间完成的与本课题相关的论文
• 致谢
• 综述
• 原创性声明及版权使用授权说明