本文主要研究内容
作者靳赛赛（2019）在《青鱼TRIF的克隆及功能研究》一文中研究指出：Toll样受体信号通路(Toll-like receptor signaling pathway)是天然免疫中的一个重要的通路,其中,β干扰素TIR结构域衔接蛋白TRIF(TIR-domain containing adaptor inducing interferon-β)是该信号通路中重要的一个组成部分。在本文中,我们首次克隆了青鱼TRIF的编码区(CDS),并对青鱼TRIF的功能做了初步的研究。取得了以下结果:1.青鱼TRIF的CDS序列由1680个碱基组成,编码559个氨基酸,用ExPASy分析其序列,预测结果显示青鱼TRIF的分子量约为63 kDa,等电点为6.43。通过对其结构的分析可知,青鱼TRIF蛋白结构域中包含了一个TIR结构域。通过遗传进化发育树比对结果分析显示青鱼的TRIF与同鲤科的草鱼TRIF氨基酸序列的同源性最高,为94.5%。由此可以看出青鱼的TRIF基因在同类鲤科鱼中的进化是相对比较保守的,但青鱼TRIF与人类和小鼠的氨基酸序列比对后同源性只有37.2%和34.4%,说明青鱼TRIF在进化的过程中氨基酸序列发生了较大的变化,蛋白质的功能和结构也有可能发生较大的改变。2.在研究TRIF基因在青鱼各个组织中的转录水平的实验中,青鱼TRIF基因在所有选定的组织中都能够稳定表达,包括肠、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和鳃六个组织,当青鱼被草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)和鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)感染后,肝脏、肠和脾脏组织中TRIF的mRNA转录水平有显著提升,其他组织升高不显著。3.在研究青鱼TRIF在体外表达的实验中,我们通过免疫印迹实验发现青鱼TRIF可以在EPC细胞和293T细胞中表达,蛋白大小约为75KD。4.为了了解青鱼TRIF在细胞中的定位,我们做了免疫荧光实验,通过共聚焦显微镜发现青鱼TRIF蛋白分布在细胞质中。5.我们通过双荧光素酶报告系统实验分析发现青鱼TRIF能够强烈地诱导斑马鱼干扰素、EPC干扰素、青鱼干扰素和人NF-κB启动子的表达,且剂量式增加。6.为了研究青鱼TRIF能否具有抗病毒的能力,我们在EPC细胞中过表达的青鱼TRIF质粒24小时之后再用病毒感染细胞,我们发现青鱼TRIF能够在EPC细胞中有效地抑制GCRV和SVCV病毒的复制。7.在研究bcTRAF2能否和bcTRIF共同影响干扰素和NF-κB启动子活性的研究中,我们共转了两种质粒,结果显示bcTRAF2能使bcTRIF上调干扰素和NF-κB启动子的能力下降。综上所述,青鱼TRIF是在抗病毒免疫信号通路中重要的一个分子,在宿主对抗GCRV和SVCV的天然免疫应答中起着重要的作用。本论文的数据为将来深入研究青鱼TRIF在天然免疫系统中的作用机制奠定了基础。
Abstract
Tollyang shou ti xin hao tong lu (Toll-like receptor signaling pathway)shi tian ran mian yi zhong de yi ge chong yao de tong lu ,ji zhong ,βgan rao su TIRjie gou yu xian jie dan bai TRIF(TIR-domain containing adaptor inducing interferon-β)shi gai xin hao tong lu zhong chong yao de yi ge zu cheng bu fen 。zai ben wen zhong ,wo men shou ci ke long le qing yu TRIFde bian ma ou (CDS),bing dui qing yu TRIFde gong neng zuo le chu bu de yan jiu 。qu de le yi xia jie guo :1.qing yu TRIFde CDSxu lie you 1680ge jian ji zu cheng ,bian ma 559ge an ji suan ,yong ExPASyfen xi ji xu lie ,yu ce jie guo xian shi qing yu TRIFde fen zi liang yao wei 63 kDa,deng dian dian wei 6.43。tong guo dui ji jie gou de fen xi ke zhi ,qing yu TRIFdan bai jie gou yu zhong bao han le yi ge TIRjie gou yu 。tong guo wei chuan jin hua fa yo shu bi dui jie guo fen xi xian shi qing yu de TRIFyu tong li ke de cao yu TRIFan ji suan xu lie de tong yuan xing zui gao ,wei 94.5%。you ci ke yi kan chu qing yu de TRIFji yin zai tong lei li ke yu zhong de jin hua shi xiang dui bi jiao bao shou de ,dan qing yu TRIFyu ren lei he xiao shu de an ji suan xu lie bi dui hou tong yuan xing zhi you 37.2%he 34.4%,shui ming qing yu TRIFzai jin hua de guo cheng zhong an ji suan xu lie fa sheng le jiao da de bian hua ,dan bai zhi de gong neng he jie gou ye you ke neng fa sheng jiao da de gai bian 。2.zai yan jiu TRIFji yin zai qing yu ge ge zu zhi zhong de zhuai lu shui ping de shi yan zhong ,qing yu TRIFji yin zai suo you shua ding de zu zhi zhong dou neng gou wen ding biao da ,bao gua chang 、xin zang 、gan zang 、pi zang 、shen zang he sai liu ge zu zhi ,dang qing yu bei cao yu hu chang gu bing du (Grass carp reovirus,GCRV)he li chun bing du xie zheng bing du (Spring viraemia of carp virus,SVCV)gan ran hou ,gan zang 、chang he pi zang zu zhi zhong TRIFde mRNAzhuai lu shui ping you xian zhe di sheng ,ji ta zu zhi sheng gao bu xian zhe 。3.zai yan jiu qing yu TRIFzai ti wai biao da de shi yan zhong ,wo men tong guo mian yi yin ji shi yan fa xian qing yu TRIFke yi zai EPCxi bao he 293Txi bao zhong biao da ,dan bai da xiao yao wei 75KD。4.wei le le jie qing yu TRIFzai xi bao zhong de ding wei ,wo men zuo le mian yi ying guang shi yan ,tong guo gong ju jiao xian wei jing fa xian qing yu TRIFdan bai fen bu zai xi bao zhi zhong 。5.wo men tong guo shuang ying guang su mei bao gao ji tong shi yan fen xi fa xian qing yu TRIFneng gou jiang lie de you dao ban ma yu gan rao su 、EPCgan rao su 、qing yu gan rao su he ren NF-κBqi dong zi de biao da ,ju ji liang shi zeng jia 。6.wei le yan jiu qing yu TRIFneng fou ju you kang bing du de neng li ,wo men zai EPCxi bao zhong guo biao da de qing yu TRIFzhi li 24xiao shi zhi hou zai yong bing du gan ran xi bao ,wo men fa xian qing yu TRIFneng gou zai EPCxi bao zhong you xiao de yi zhi GCRVhe SVCVbing du de fu zhi 。7.zai yan jiu bcTRAF2neng fou he bcTRIFgong tong ying xiang gan rao su he NF-κBqi dong zi huo xing de yan jiu zhong ,wo men gong zhuai le liang chong zhi li ,jie guo xian shi bcTRAF2neng shi bcTRIFshang diao gan rao su he NF-κBqi dong zi de neng li xia jiang 。zeng shang suo shu ,qing yu TRIFshi zai kang bing du mian yi xin hao tong lu zhong chong yao de yi ge fen zi ,zai su zhu dui kang GCRVhe SVCVde tian ran mian yi ying da zhong qi zhao chong yao de zuo yong 。ben lun wen de shu ju wei jiang lai shen ru yan jiu qing yu TRIFzai tian ran mian yi ji tong zhong de zuo yong ji zhi dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自湖南师范大学的靳赛赛，发表于刊物湖南师范大学2019-10-31论文，是一篇关于青鱼论文,天然免疫论文,湖南师范大学2019-10-31论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自湖南师范大学2019-10-31论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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