尿液检测HIV抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制以及pET28a-gp41重组质粒的构建

论文摘要

获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS）是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）感染所致的以循环CD4+T细胞显著下降、机会感染及恶性疾病为特征的继发性免疫缺陷综合征。在HIV感染后,最先能够监测到的是病毒RNA、然后是p24抗原,最后是抗体。在全世界范围早期对HIV的检测主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。检测血液中的抗HIV抗体一直被认为是诊断AIDS的前提。传统的血液检测法对医院的环境设施及相关医务人员水平有较高的要求,检测周期也较长,而且还存在交叉感染的危险。但近来研究表明,在HIV感染者的尿液中也可检查到HIV抗体,这一发现为艾滋病检测提供了一个全新的发展方向,从尿液标本中进行HIV抗体检测也成为了国际上最新的非侵入性诊断艾滋病毒的新技术。中国是一个多民族的国家,HIV/AIDS高发区在西部地区也以少数民族为主,而且70.6%的HIV感染源由于静脉毒瘾,因此,血液标本的采集是HIV/AIDS防治工作中的一个大的问题。与血液检查相比,尿液检查有多种优点:尿液中一般不存在HIV病毒、采集时不会引起皮肤损伤。所以尿液HIV-1抗体检查是一种相对安全而便捷的检测方法。尿液检测HIV/AIDS工作的开展,做到了无损伤检测,很好地解决了这一问题,使HIV筛查工作有了更好的措施,对于早期发现HIV感染者具有良好的社会和经济价值。本研究力求建立一种快速、简易的用于检测人尿液中抗HIV-1抗体的胶体金免疫层析试纸条,便于早期HIV的大范围筛查。同时本研究研制HIV-1的gp41基因重组抗原,为生产抗HIV抗体诊断试剂提供优质抗原。方法一.胶体金免疫层析试纸条的研制采用柠檬酸三钠还原法制备直径为20nm的胶体金颗粒,测定胶体金与标记用gp41抗原的最适用量之比;标记HIV-1 gp-41抗原,将标记物喷于预先处理过的玻璃纤维上。将包被用抗原划点固定于硝酸纤维素膜上,用于抗HIV-1抗体的捕捉,同时将包被用抗HIV-1 gp41的鼠源性单克隆抗体划点固定于硝酸纤维素膜上;按常规组装成免疫层析检测试条。二.pET28a-gp41重组质粒的构建通过RT-PCR扩增合成目的片段,然后用限制性内切酶将其与原核表达载体pET-28a定向连接,构建成重组质粒转入大肠杆菌DH5a菌中,挑阳性克隆,双酶切鉴定产物,并进一步进行序列测定。结果一.HIV-1 gp41抗体的检测阳性HIV患者尿液中的抗HIV抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色圆点。二.HIV-1跨膜蛋白gp-41载体的构建重组结果经酶切鉴定,证实构建成功。经测序进一步证明插入基因正确结论1.本研究所研制的胶体金免疫层析试纸条临床应用方便、安全、经济,在HIV早期大范围筛查中具备很大的市场价值。2.已成功构建了HIV-1 gp-41的原核表达载体,为进一步表达蛋白质并纯化奠定基础。

论文目录

• 一、摘要
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简介