组织工程皮肤种子细胞培养及免疫原性的初步研究

论文摘要

目的:本试验旨在探索一种能够明显缩短角质形成细胞（keratinocyte, KC）培养时间的细胞接种密度和适合组织工程应用的角质形成细胞培养基。通过检测各代角质形成细胞中朗格汉斯细胞（langerhans cell, LC）、黑色素细胞（melanocyte, MC）数量变化,及异体淋巴细胞混合试验,揭示不同代角质形成细胞、成纤维细胞免疫原性的变化,为皮肤组织工程科学选择种子细胞提供实验依据。方法: （1）0.25%分离酶,0.125%胰酶0.01%EDTA 两步酶法分离包皮角质形成细胞,按不同密度接种,K-SFM、FAD 培养基和基础培养基分别培养,观察原代融合生长时间,传代生长情况。（2）ATP 酶化学染色,免疫组化检测各代角质形成细胞中朗格汉斯细胞、黑色素细胞数量的变化。（3）将冻存的不同代数人角质形成细胞和成纤维细胞,分别与健康的同种异体志愿者的外周血淋巴细胞混合,建立异体细胞体外免疫排斥模型。通过H3-TdR 标记,液体闪烁计数仪检测异体淋巴细胞增殖情况。结果: （1）采用中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化的方法,真、表皮容易分离,台盼兰染色,活细胞数占总细胞数的95%以上。原代角质形成细胞接种密度在1×105/cm2～5×105/cm2 时,细胞贴壁好,增殖速度快,体外培养周期显著缩短。与FAD 培养基和基础培养基比较,K-SFM 培养的细胞呈单层生长,数代后细胞形态与原代细胞仍然十分相似,且生长较快。（2）ATP 酶染色仅在表皮铺片中呈阳性。免疫组化染色原代角质形成细胞中混有5.8%朗格汉斯细胞和8.1%黑色素细胞,Ⅰ代角质形成细胞中混有2.1%朗格汉斯细胞和2.8%黑色素细胞。从Ⅱ代开始,角质形成细胞混杂的朗格汉斯细胞和黑色素细胞均消失。（3）异体淋巴细胞增殖实验中,cpm 值随角质形成细胞、成纤维细胞代数增高,逐渐降低。原代、Ⅰ代角质形成细胞、成纤维细胞cpm 值下降明显,Ⅱ代、Ⅲ代、Ⅳ

论文目录

• 英文缩写与注释
• 英文摘要
• 中文摘要
• 论文正文 组织工程皮肤种子细胞培养及免疫原性的初步研究
• 前言
• 实验一组织工程用角质形成细胞的培养
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验二组织工程皮肤种子细胞免疫原性的初步研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 致谢
• 照片
• 文献综述一 角质形成细胞体外培养的研究进展
• 文献综述二 组织工程皮肤种子细胞免疫原性的研究进展
• 在读期间发表文章