RNAi阻断CDK2基因表达对RB基因表达的影响及树舌多糖GF辅助作用的研究

论文摘要

目的：通过将己构建成功的针对CDK2基因的siRNA真核表达载体，转染至人肝癌细胞株SMMC7721中，研究其对细胞周期调控网络中RB基因表达的影响，以及中药树舌多糖GF对其的辅助作用。方法：将已构建成功的针对CDK2基因的siRNA真核表达载体通过阳离子脂质体试剂法转染肝癌细胞株SMMC7721，利用实时荧光定量PCR技术研究RNAi抑制CDK2基因后对细胞周期调控网络中相关基因RB的mRNA水平的影响；MTT法检测树舌多糖GF体外对SMMC7721细胞增殖抑制情况并筛选出体外抗瘤的有效树舌多糖GF剂量；并采用荧光定量PCR技术研究树舌多糖对肝癌SMMC7721细胞中RB基因表达的影响并探讨该多糖对其的辅助作用。结果：1．树舌多糖GF2．5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1对肝癌细胞增殖有明显抑制作用，抑制率分别为20．01％、20．47％、24．44％。2．树舌多糖GF2．5μg·mL-1、10μg·mL-1可使RB基因mRNA表达水平上调。与SMMC7721相比，树舌多糖GF2．5μg·mL-1组与树舌多糖GF10μg·mL-1组RB基因mRNA水平分别上调63％、64％。3．RNAi抑制CDK2基因表达后对RB基因mRNA表达有影响，siRNA190组中RB基因上调56％，siRNA19．1组中RB基因的mRNA表达上调11％。4．与单纯siRNA191组相比，树舌多糖GF2．5μg·mL(-1、10μg·mL-1与siRNA191组合用可分别使肝癌细胞中RB基因mRNA水平上调5％、4％；与单纯siRNA190组相比，树舌多糖GF2．5μg·mL-1、10μg·mL-1与siRNA190组合用均未能使肝癌细胞中RB基因mRNA水平上调。结论：1．肝癌SMMC7721细胞的过度增殖与RB基因缺失性表达关系密切。2．树舌多糖GF对体外肝癌细胞株SMMC7721的增殖有明显抑制作用，其机制可能是通过上调RB基因表达实现的。3．肝癌细胞中RB基因的mRNA表达与CDK2基因的表达有明显的关联性，RNAi特异地沉寂肝癌细胞中CDK2基因后，RB基因表达上调。4．树舌多糖GF对RNAi特异沉寂肝癌细胞CDK2基因表达后上调RB基因表达有一定的辅助作用，表明树舌多糖GF可能成为肝癌基因治疗中的一个新型辅助药物。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献综述
• 一 肿瘤的流行病学及中医对肿瘤的认识
• 二 中药抗肿瘤研究概况
• 三 抑癌基因RB与肿瘤
• 四 RNAi技术在肿瘤治疗中的应用
• 五 关于树舌
• 六 展望
• 实验研究
• 第一部分 树舌多糖GF对肝癌细胞株SMMC7721增殖及RB基因的影响的实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 第二部分 RNAi技术沉寂肝癌细胞CDK2基因表达对RB基因表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 第三部分 树舌多糖GF在RNAi沉寂肝癌细胞CDK2基因表达后对RB基因表达的辅助作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读硕士学位期间发表的论文