长春花化学成分的分离及分析

论文摘要

目的:通过对长春花（Catharanthus roseus （L.） Don）化学成分的分离及分析研究,以期达到以下目的:（1）建立长春花中生物碱类成分的薄层分析,初步比较其生物碱类成分的组成;（2）对长春花中的化学成分进行分离与结构鉴定;（3）建立长春花中文多灵生物碱等化学成分的HPLC含量分析方法;（4）开展长春花HPLC指纹图谱的研究,为长春花药材的整体质量控制提供可靠方法;（5）探讨长春花中文多灵、长春质碱等生物碱一年内的动态变化规律,及其长春花生物碱的相关性,为长春花GAP种植提供数据支持。方法:长春花化学成分的薄层分析与分离:采用硅胶预制板,以甲醇-氯仿（9:1）为展开剂,文多灵、长春碱等多种生物碱为对照品,改良碘化铋钾为显色剂,对不同产地长春花样品进行薄层分析;以无水乙醇对样品进行反复提取,过滤,合并滤液,并浓缩至流浸膏,采用硅胶柱色谱层析法,先后以石油醚:丙酮:氯仿（15:5:0.5）系统与甲醇-氯仿（9:1.5）系统进行洗脱,对其化学成分进行分离。长春花中文多灵等成分的HPLC含量测定:以yilite C18柱（10μm, 4.6 mm x 250 mm）为色谱柱,甲醇∶水（64∶36,以二乙胺调pH11）为流动相;流速为1ml/min;检测波长220nm,建立文多灵的HPLC分析方法。同时,以yilite C18柱（10μm, 4.6 mm x 250 mm）为色谱柱,乙腈∶水（90∶10）为流动相,流速为1ml/min;检测波长220nm,建立了熊果酸的HPLC测定法。长春花生物碱类成分的HPLC指纹图谱研究:以yilite C18柱（10μm, 4.6 mm x 250 mm）为分析柱,甲醇∶水（61∶39,以二乙胺调pH11）为流动相,检测波长254nm,检测时间为1h为分析条件,对样品进行了HPLC分析,并采用中药指纹图谱相似度计算软件对不同时间、不同部位以及不同品种长春花色谱图进行相似性分析,对长春花的质量进行了整体评价。长春花中文多灵、长春质碱等生物碱类成分的含量动态变化及其积累相关性研究:根据HPLC分析的结果,分析了在一年的生长期内文多灵、长春质碱等生物碱积累的动态变化;同时运用SPSS软件初步探讨了长春花生物碱积累的相关性。结果:长春花化学成分的薄层分析分析显示,不同产地长春花样品中均含有生物碱,其中文多灵为主要成分,除香港的长春花外,其他产地中的长春质碱也较为丰富,长春碱与长春新碱较微弱。从长春花样品中分离得到了7个化合物,并根据理化性质和光谱数据鉴定了其中的五个化合物,分别为其中CH-1为正三十烷,CH-3为二十五酸二十四烷酯,CH-4为1-甲基二十四烷醇,CH-5为二十八烷醇,CH-12为熊果酸。应用建立的HPLC分析方法成功测定了不同来源的长春花中文多灵生物碱的含量,结果表明不同来源的长春花中文多灵含量存在差异。不同产地中文多灵生物碱的含量最高的为恩平,达1.848 mg/g;不同品种中文多灵生物碱含量最高的为白花黄心品种,含量为0.934 mg/g。首次建立了长春花中熊果酸的HPLC含量测定的方法,测定了长春花不同部位中熊果酸的含量。其含量分别为:全草7.416 mg/g,叶15.427mg/g,茎6.980 mg/g,花5.702mg/g。建立了长春花的HPLC指纹图谱,显示有13个共有峰,方法学考察符合指纹图谱技术要求。相似度计算表明,广东不同时期采收长春花的相似度较大,达到0.9以上,不同部位与不同品种间的相似度较小。长春花中文多灵、长春质碱生物碱类成分含量的动态变化及其积累的相关性分析表明:一年的生长时期中,长春花文多灵生物碱的含量差异较大,茎中文多灵的含量在10-2月处于上升阶段,2-9月总体处于下降阶段。叶中文多灵的含量则在10-3月与4-9月,分别呈现上升与下降的趋势。与茎、叶相比,花与果中文多灵生物碱的含量动态变化较为复杂;花中长春质碱在10-11月份处于上升,在11-2月份下降,2月份,含量开始上升,并在3-9月处于平缓阶段。叶中长春质碱在1-4月份中,总体呈上升趋势,在四月份达到最大值后急剧下降,在5-8月份,其含量又逐渐上升,在7-11月份中,长春质碱含量变化相对较为平缓。果中长春质碱含量主要集中在一年中的下半年,茎中几乎不含长春质碱。相关性分析结果表明,文多灵生物碱的含量与长春碱、长春质碱含量之间的相关系数分别为0.465、0.600,长春质碱的含量与长春碱的含量相关系数为0.471,相关性均显著（P<0.01）。结论:①确定了长春花生物碱成分的薄层分析条件,该方法稳定可靠,重复性好,并从长春花中分离得到七个化合物。②建立了文多灵生物碱的HPLC分析方法,测定了不同产地不同品种长春花中文多灵生物碱含量。③首次测定了长春花中熊果酸含量,结果表明叶中含量最高,花中最低。④首次建立长春花HPLC指纹图谱方法,并同时考察了其中的文多灵、长春质碱等多种生物碱的含量,所采用的方法灵敏、准确、重复性好、专属性强,可作为长春花药材整体质量控制的标准。○5相关性分析结果表明,各生物碱之间以及不同部位中生物碱之间存在显著的相关性,生物碱含量与产地、品种、温度之间不存在显著的相关性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 长春花化学成分的分离及分析研究进展
• 1 长春花药用植物资源的研究状况
• 2 长春花化学成分的研究概况
• 第二章 长春花化学成分的薄层分析与分离
• 1 仪器与试药
• 2 长春花生物碱类成分的薄层层析研究
• 3 长春花化学成分的分离研究
• 3.1 样品的提取
• 3.2 样品的分离
• 3.3 结构鉴定
• 4 小结与讨论
• 第三章 长春花中文多灵等成分的HPLC 含量分析
• 1 仪器与试药
• 2 长春花中文多灵生物碱成分的HPLC 含量分析
• 2.1 色谱条件
• 2.2 对照品的制备
• 2.3 样品溶液的制备
• 2.4 线性关系考察
• 2.5 精密度试验
• 2.6 重复性试验
• 2.7 稳定性试验
• 2.8 加样回收率试验
• 2.9 长春花中文多灵的含量测定
• 3 长春花中熊果酸成分的HPLC 含量分析
• 3.1 方法学考察
• 3.2 长春花样品中熊果酸的HPLC 含量测定
• 4 小结与讨论
• 第四章 长春花生物碱类成分的HPLC 指纹图谱研究
• 1 仪器与试药
• 2 长春花生物碱类指纹图谱研究的条件优化
• 2.1 色谱条件的选择
• 2.1.1 流动相的优化
• 2.1.2 测定波长的选择
• 2.1.3 分析时间的考察
• 2.2 样品前处理条件的优化
• 2.2.1 提取方法的优化
• 2.2.2 过柱材料的选择
• 2.2.3 洗脱溶剂量的选择
• 3 长春花生物碱类成分的指纹图谱的构建
• 3.1 色谱条件
• 3.2 对照品溶液的制备
• 3.3 供试品溶液的制备
• 3.4 方法学考察
• 3.4.1 精密度试验
• 3.4.2 重复性试验
• 3.4.3 稳定性试验
• 3.4.4 线性关系考察
• 3.4.5 回收率试验
• 3.5 指纹图谱及技术参数
• 3.5.1 指纹图谱的测定、共有峰的确认及参照峰的选择
• 3.5.2 指纹图谱相似度的计算
• 3.5.3 不同部位的长春花HPLC 指纹图谱比较
• 3.5.4 不同品种的长春花样品的HPLC 指纹图谱比较
• 4. 小结与讨论
• 第五章 长春花文多灵、长春质碱等生物碱含量的动态变化及其积累的相关性研究
• 1 仪器与试药
• 2 方法
• 2.1 色谱条件与系统适应性考察
• 2.2 数据统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 动态变化分析
• 3.2 生物碱类积累的相关性分析
• 4 小结与讨论
• 4.1 文多灵、长春质碱生物碱类成分含量的动态变化研究
• 4.2 生物碱类成分积累的相关性分析
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文和申请专利
• 致谢